资源描述：
《ctab法提取苏铁基因组dna的条件优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、CTAB法提取苏铁基因组DNA的条件优化第22卷第2/3期2007年6月郑州轻工业学院(自然科学版)JOURNALOFZHENGZHOUUNIVERSITYOFLIGHTINDUSTRY(NaturalScience)VD1.22No.2/3Jun.2O07文章编号:1004—1478(20o7)02/03一OO6O一05CTAB法提取苏铁基因组DNA的条件优化李东亮,金红,张勇,翟伟博,景建洲,.(1.郑州轻工业学院食品与生物工程学院,河南郑州450002;2.深圳市仙湖植物园科技部,广东深圳518034;3.河南省生物工程与技术研究中心,河南郑州450002)
2、摘要:采用单因素梯度试验结合正交实验的方法(CTAB法),优化了苏铁类植物全基目组DNA提取工艺.研究表明:材料量对提取DNA的浓度,提取率和纯度的影响最为明显,但还没有达到显着水平;最佳工艺参数为:20mg苏铁羽片,65℃水浴处理30min,抽提后,加入800L无水乙醇和5L饱和NaC1溶液,6000r/min离心4min沉淀DNA;溶解再沉淀后的DNA,质量浓度可达0.2413g/L,提取率可达0.483%,lOD26o/OD280—1.8l<0.0l,.-q-~满足RAPD—PCR分子标记技术应用.关键词:苏铁;CTAB法;分子标记中图分类号:Q949
3、.9文献标识码:AResearchofoptimizingCTABmethodinDNAextractionofcycadusingorthogonalexperimentdesignLIDong.1iang,JINHong2,ZHANGYong,ZHAIWei-bo,JINGJian-zhou?(1.CollegeofFoodandBiologyEng.,ZhengzhouUnw.ofUghtInd.,Zhengzhou450002,Ch/na;2.Dept.ofSci,Tech.ShenzhenFairylakeBotanicalGarden,Shenzhen
4、518034,Ch/na;3.HenanBioengineeringTech.ReserchCenter,Zhengzhou450002,China)Abstract:CTABmethodinDNAisolationofcycadplantswasoptimizedusinggradsmonofactorexperi-mentorthogonalexperimentdesign.Resultshowedthat:thematerialquantityplaysamostprimarybutnotremarkableroleinisolatingamountandp
5、urificationandquotietyofDNA.Thebestparameteroftech-nology:20mgcycadspinna,30minin65℃water,addto800IxLanhydrousethanoland5IxLsatura-tionNaC1.6000r/mincentrifugefor4raintosubsideDNA.TheconcentrationofthepurificatedDNAiS0.24l3g/L,t}lequotietyofDNAextractionis0.483%,lOD260/OD280—1.8I<0
6、.01.,I1leextractedDNAcanbeusedtoRAPD—PCRmolecularmarkers.Keywords:cycad;CTABmethod;molecularmarkers收稿日期:2006—1O一17基金项目:郑州轻工业学院科研基金资助项目作者简介:李东亮(198l一),男,河南省武陟县人,郑州轻工业学院硕士研究生,主要研究方向:植物细胞工程通讯作者:景建州(1964一),男,陕西省西安市人,郑州轻工业学院教授,主要研究方向:植物细胞工程.第2/3期李东亮等:CTAB法提取苏铁基因组DNA的条件优化?61?0引言苏铁类植物起源古老,是地
7、球上现存的最原始的种子植物之一,素有"植物界大熊猫"及"活化石"之称.由于近几十年间大规模的农业开发,许多产地的苏铁类植物失去了赖以生存的环境,再加上人为的挖掘,苏铁类植物濒临灭绝.目前对苏铁类植物的研究主要集中在种质资源收集与保护,系统分类,生理生化,遗传育种以及开发研究等方面,而这些不能从根本上解决其面临的主要问题——适应环境和繁衍后代,只有从基因方面对苏铁类植物进行根本研究,才能从源头上解决其生存和发展问题.在苏铁类植物分子研究方面,XIAOLQ等…建立了贵州苏铁ISSR分子标记,马永等建立了叉孢苏铁ISSR分子标记.构建植物基因组文库,建立相关分子标记等都
8、需要高质量
