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1、CTAB十六烷基三甲基溴化铵别称:西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵,鲸熔三甲基溴化铵;CTAB;CTMAB;HTAB;CTABr;阳性皂 英文名HexadecyltrimethylammoniumBromide;CetrimoniumBromide 分类季铵盐 分子式C16H33(CH3)3NBr 分子量364.446 熔点:250-237℃ 溶解性:13g/L(20°C) 密度:1.3220g/mlCTAB提取缓冲液:100mmol/LTris-HCl(pH8.0),20mmol
2、/LEDTA-Na2,1.4mol/LNaCl(如表1),2%CTAB,使用前加入0.1%(V/V)的β-巯基乙醇。提取DNA配方 CTAB为十六烷基三甲基溴化铵, CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏; EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性; NaCl提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中; Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。 CTAB4g NaCl1
3、6.364g 1MTris-HCl20ml(PH8.0) 0.5MEDTA8ml,先用70mlddH2O溶解,再定容至200ml灭菌 冷却后0.2-1%2-巯基乙醇(400ul)氯仿-异戊醇(24:1):先加96ml氯仿,再加4ml异戊醇,摇匀即可。提取RNA配方 2%CTAB(W/V) 2%聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V) 100mMTris-HCl(pH8.0,DEPC处理的水配置) 25mMEDTA 0.5g/L亚精胺Spermidine 2.0MNaCl,2%巯基乙醇(V/V,
4、使用前加入)由于在高温灭菌条件下,Tris-HCl要和DEPC发生反应,所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC处理的水配制即可。CTAB提取缓冲液:100mmol/LTris-HCl(pH8.0),20mmol/LEDTA-Na2,1.4mol/LNaCl(如表1),2%CTAB,使用前加入0.1%(V/V)的β-巯基乙醇。提取DNA配方 CTAB为十六烷基三甲基溴化铵, CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏; EDTA螯合Mg2+或Mn
5、2+离子,抑制DNase活性; NaCl提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中; Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。 CTAB4g NaCl16.364g 1MTris-HCl20ml(PH8.0) 0.5MEDTA8ml,先用70mlddH2O溶解,再定容至200ml灭菌 冷却后0.2-1%2-巯基乙醇(400ul)氯仿-异戊醇(24:1):先加96ml氯仿,再加4ml异戊醇,摇匀即可。提取RNA配方 2%CTAB(W/V)
6、 2%聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V) 100mMTris-HCl(pH8.0,DEPC处理的水配置) 25mMEDTA 0.5g/L亚精胺Spermidine 2.0MNaCl,2%巯基乙醇(V/V,使用前加入)由于在高温灭菌条件下,Tris-HCl要和DEPC发生反应,所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC处理的水配制即可。 CTAB法提取植物DNACTAB提取缓冲液配方:1mMTris-HCl(PH8.0);20mMEDTA(PH8.0);1.4MNaCl;2%CTAB(W/V);2%聚
7、乙烯吡咯烷酮PVP(W/V)。 (1)取材料(3片叶)移入1.5mlEppendorf管中,迅速加液氮研磨成粉末状;(2)加入600μl的CTAB提取缓冲液(CTAB在65℃水浴预热),加3μlβ-巯基乙醇(0.2-1%),混匀,60-65℃水浴30min-1h。每5min轻轻摇动几次,开始可以颠倒,后期轻缓;(3)30min后,加入1/3V的5MKAc混匀冰浴30min,4℃,12000r/min,离心15min;(4)小心吸取上清液,移入新的1.5mlEppendorf管中,加入等体积的冷冻氯仿
8、-异戊醇(24:1),混匀,4℃,12000r/min,离心10min。(5)重复步骤(4)1-2次,以蛋白层不出现为止;(6)取上清,加等体积冷冻异丙醇,混匀,-20℃沉淀40min,4℃,12000r/min,离心10min;(7)弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀1-2次,12000r/min,离心10min;(8)室温下干燥后(一般干燥5-15min),溶于20-30μl去离子水中,加1μlRNase(10μg/μl,终浓度10μg/ml),37℃