利用改进的酚-氯仿法从猪毛囊中提取基因组dna

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1、HEREDITAS(Beijing)2010年7月,32(7):752―756ISSN0253-9772www.chinagene.cn技术与方法DOI:10.3724/SP.J.1005.2010.00752利用改进的酚-氯仿法从猪毛囊中提取基因组DNA1,21121王继英,俞英,冯利霞,王怀中,张勤1.中国农业大学动物科技学院,北京100193;2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100摘要:为提高从猪毛囊组织中提取基因组DNA的效率,文章在借鉴从其他组织提取基因组DNA方法的基础上,对经典的酚-氯仿法的反应体系和步骤进行了改进。利用改进的酚－氯仿抽提法,从

2、猪的毛囊组织中快速、高效地提取了高质量基因组DNA。利用该方法从1~6根猪毛囊中提取的基因组DNA可满足基于PCR技术的相关分子生物学实验需要。关键词:猪毛囊组织;基因组DNA;酚-氯仿法GenomicDNAextractionfromhairsacsofpigsusingmodifiedphenol-chloroformmethod1,21121WANGJi-Ying,YUYing,FENGLi-Xia,WANGHuai-Zhong,ZHANGQin1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,ChinaAgriculturalUniver

3、sity,Beijing100193,China;2.InstituteofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,ShandongAcademyofAgriculturalScience,Jinan250100,ChinaAbstract:InreferringtovariousmethodsforgenomicDNAextractionfromdifferenttissues,wemodifiedtheclassicalphenol–chloroformprocedureandreactionsystemforuseingenomicDN

4、Aextractionfrompighairsacs.Withthemodifiedthephenol–chloroformmethodwesuccessfullyobtainedhighqualitygenomicDNAfrompighairsacs.GenomicDNAcanbeextractedfromsacsofonetosixpighairswithsatisfiedquantityandqualityfortheneedofPCR-basedmolecularex-periment.Keywords:pighairsac;genomicDNAextractio

5、n;phenol–chloroformmethod在猪分子遗传研究中,绝大多数的研究采用血都带有完整的毛囊。从动物毛囊组织提取基因组[2~6]液、耳组织、肝脏等作为DNA模板来源。但在对本DNA的方法研究已有多例报道,但因为毛囊组地猪及野猪研究过程中,血样、耳组织等获得较为织量少且含有较多的角蛋白而不易消化,用其提取困难,而猪毛囊不失为一种重要的DNA模板源,因的基因组DNA通常量少而且质量不高。因此探索从为:①采样过程简单,便于操作,尤其适用于野性毛囊中提取高质量的基因组DNA的提取方法具有较强的地方猪种猪群;②便于贮藏与运输;③不重要的意义。易损伤动物。毛发中的DNA

6、主要集中在毛囊细胞酚、氯仿抽提DNA是最为经典,也是一般实验中。在从动物体上采集或脱落的毛发中,绝大多数室常用的方法,上皮、血液、肌肉组织等均可采用收稿日期:200912;修回日期:20100314基金项目:国家转基因重大专项(编号：2009ZX08009-146B),国家重点基础研究发展规划(973计划)项目(编号：2006CB102104),国家高技术研究发展计划项目(863计划)(编号：2008AA101002)和国家自然科学基金项目(编号：30800776)资助作者简介:王继英(1977),女,在读博士,研究方向：动物分子数量遗传学。E-mail:j

7、nwangjiying@163.com通讯作者:张勤(1956),男,教授,博士生导师,研究方向：动物分子数量遗传学、计算机在动物育种中的应用。E-mail:qzhang@cau.edu.cn第7期王继英等:利用改进的酚-氯仿法从猪毛囊中提取基因组DNA753该方法。本研究在借鉴其他组织基因组DNA提取的1~4μL基因组DNA,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳,基础上,优化反应体系和步骤,利用酚-氯仿抽提法,利用凝胶成像系统(BIO-RAD)观察、拍照。从1～6根猪的毛囊组织中快速、高效地提取了高质1.2.3PCR检测量基因组D