大豆总RNA提取方法比较及其在基因克隆和表达分析中的应用-论文.pdf

《大豆总RNA提取方法比较及其在基因克隆和表达分析中的应用-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、分子植物育种，2013年，第l1卷，第2期，第255—261页MolecularPlantBreeding，2013，Vo1．11，No．2，255—261技术主题TechnologyFeature大豆总RNA提取方法比较及其在基因克隆和表达分析中的应用郭彬，2侯思宇·黄可盛t，2路阳1韩渊怀1王玉国2’1山西农业大学生物工程研究所，太谷，030801；2山西农业大学农学院，太谷，030801。通讯作者，tgwygn@126．corn摘要为确立大豆叶、花组织提取总RNA的最佳方法，比较了植物总RNA提取试盒剂法、改良的CTAB．LiCL法和改良的热硼酸

2、法的提取效果。通过RNA产量、纯度、凝胶电泳及后续的基因克隆和荧光定量PCR等分析，结果表明：热硼酸法所提取的叶、花总RNA含量约为其他两种方法的6倍；总RNAODOD28o值介于1．98—2．1；电泳条带完整清晰；应用获得的总RNA所克隆ZAT9一like基因，经测序获得885bp的核酸序列与ZAT9-1ike(登录号：XM003517371．1)基因同源率达99％；荧光定量分析HistoneH3基因的扩增曲线与融解曲线峰型良好。说明该方法能够满足一般分子生物学下游实验的要求，是一种理想的针对大豆叶、花总RNA的的提取方法。关键词大豆，总RNA，热硼

3、酸法DifferentMethodsforExtractingTotalRNAandTheirApplicationinGeneCloningandGeneExpressionAnalysisinSoybean(Ginemax)GuoBin工HouSiyuHuangKeshengLuYangHanYuanhuaiWangYuguo’1InstituteofAgriculturalBioengineedngs，Taigu，030801；2SchoolofAgriculture，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu，0308

4、01Correspondingauthor,tgwygn@126．cornDOI：10．3969／mpb．011．000255AbstractInordertofindouttheoptimalmethodforextractingtotalRNAfromleavesandflowersinsoybean(Gfyc船，扎)，extractingeficiencywascomparedamongthreemethodsofRNAextraction，RNApureplantkit，modifiedCTABandhotborate．Theyieldandp

5、urityoftotalRNAweredeterminedbynucleicacidandproteindetector；integrityandqualityoftotalRNAwereanalyzedbyagrosegelelectrophoresis，genecloningandreal—timePCR．刀leresultsshowedthattheyieldoftotalRNAbyusinghotboratewassixtimesthatbytheothermethods(RNApureplantkitandmodifledCTAB)．Thev

6、alueofOD~／OD2帅wasbetween1．98to2．01；Theelectr·ophoresisresultofRNAshowedsatisfactorybandswithsharpnessandintegrity．ZAT9一likegenewasobtainedbycloningfromthetotalRNA，sequencedtothenucleicacidsequenceof885bp，showingupto99％homologytoZAT9一likegene．Inreal-timePCRamplification，curvepeak

7、typeandthemeltingcurvepeaktypewerebetterwithRNAextractedwithhotboratethantheothermethods．ThequalityoftheRNAbyhotboratewasofhighqualityforgenecloning，real—timePCRandtheotherdownstreamapplicationinmolecularbiology．、KeywordsGlycine，懈，RNAextraction，Hotboratemethod提取植物组织中总RNA是对植物分子生物

8、学的建立以及转录组测序等后续试验。植物组织中所方面进行研究的必要手段。高质量的总RNA可进行含