大豆酰基载体蛋白硫酯酶基因及其启动子表达方式的初步分析-论文.pdf

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1、第31卷第5期大豆科学Vol_3lNo．520l2年10月SOYBEANSCIENCEOct．20l2大豆酰基载体蛋白硫酯酶基因及其启动子表达方式的初步分析赵艳，杨晓杰，范震宇，祁宏英(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江齐齐哈尔161006)摘要：利用实时定量PCR方法，检测大豆酰基载体蛋白硫酯酶(acyl-ACPthioesterase)基因在大豆各组织中的表达方式，结果显示该基因在大豆根、茎、叶、花中的表达活性低，而种子中的表达活性较高。利用PCR方法，克隆大豆acyl—ACPthioesterase基因5端上游2057bp序列，命名为AP。在线

2、启动子预测软件分析结果表明AP序列中含有多种典型的种子特异表达元件，如RYrepeat、SEF1motif、SEF3motif、SEF4motif、E—box、ACGT等顺式作用元件，推测大豆acyl—ACPthioesterase基因启动子具有种子特异表达活性。关键词：大豆；酰基载体蛋白硫酯酶基因；启动子；克隆中图分类号：Q756文献标识码：A文章编号：1000—9841(2012)05-0714-04PreliminaryAnalysisoftheExpressionPatternofSoybeanacyl-ACPThioesteraseGenean

3、dPromoterZHAOYan，YANGXiao-jie，FANZhen—yu，QIHong—ying(CollegeofLifeScienceandAgro—forestry，QiqihaerUniversity，Qiqihaer161006，Heilongjiang，China)Abstract：Theexpressionpatternofsoybeanacyl—ACPthioesterasegeneinsoybeantissueswasdetectedbyreal—timequantita—tivePCR(RTQ—PCR)．Theresultsh

4、owedthattherewerealittleactivityinroots，stems，leavesandflowers，buttherewashigh—eractivityinseeds．The5一flankingupstreamsequenceofsoybeanacyl—ACPthioesterasegene，namedAP，wasisolatedfromsoybeangenomicDNAbyPCRmethod，andthelengthwas2057bp．SequenceanalysisbyPLACErevealedthatthisfragmen

5、tcontainedaseriesofmotifsrelatedtoseed—specificpromoters，suchasRYrepeat，SEF1motif，SEF3motif，SEF4motif，E—boxandACGT．ItcanbeinferredthatAPpromoterpossessthefunctiondrivendownstreamgeneexpressionexclusivelyinsoybeanseeds．Keywords：Soybean；acyl—ACPthioesterase；Promoter；Cloning启动子是基因转录

6、调控中重要的调控元件。谢途径中相关的种子特异表达基因，同源性搜索大近年来，具有调控下游基因种子专一性表达特性的豆中的种子特异表达基因。棉花acyl—ACPthioester—种子特异性启动子已成为研究热点。种子特异性ase基因启动子是种子特异性启动子，能够驱动鼠启动子主要来源于粮食作物和油料作物种子中富类乳腺细胞中特有的脂肪酸水解酶基因在转基因含的蛋白质、氨基酸、淀粉、脂类等合成代谢途径中油菜种子中特异性表达11-12]。因此，本研究根据棉相关的酶基因的5端上游序列⋯。大豆是富含脂花的acyl—ACPthioesterase基因的氨基酸序列，获得类、蛋白

7、质及多种营养元素的重要经济作物。大豆大豆acyl-ACPthioesterase基因的序列，并克隆其5中已克隆的种子特异性启动子并在转基因研究中端上游约2000bp的序列；利用实时荧光定量PCR得到应用的主要有伴大豆球蛋白、球蛋白、油和生物信息学方法对大豆acyl—ACPthioesterase基因质蛋白[4和凝集素l5的启动子。获得更多的大豆及其启动子序列进行初步分析。种子特异性启动子能够有效降低同源转录基因沉1材料与方法默，促进大豆转基因工程研究。种子特异表达基因的研究是获得种子特异性1．1供试材料启动子的关键。确定种子特异表达基因的方法很大豆品种吉

8、豆2号、大肠杆菌DH5为本实验多，如基因芯片技术J、EST分析j，半定量一室保存