大豆class Ⅲ酸性内切几丁质酶基因及其启动子表达方式-论文.pdf

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1、中国油料作物学报2013，35(2)：221—224ChineseJournalofOilCropSciencesdoi：10．7505／j．issn．1007—9084．2013．02．019大豆classIII酸内切几丁质酶基因及其启动子表达方式赵艳，沙伟，金忠民，张梅娟(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，遗传重点实验室，黑龙江齐齐哈尔，161006)摘要：利用实时定量PCR方法，检测大豆classIII酸性内切几丁质酶基因在大豆各组织中的表达，结果显示该基因在大豆根、茎、叶中的表达活性低，而花和种子中的相对表达活性极高。利用PCR方法，克隆大豆c

2、lassIII酸性内切几丁质酶基因5’端上游2000bp序列，命名为cP。在线启动子预测软件分析，结果表明cP序列中含有多种典型的种子特异表达元件和花特异表达的元件，如SEF4motif、E～box、G—box、(CA)、AACA、ACGT、CCAA；52一box、ntp303一box、GTGA、TACPyATbox。推测大豆classIll酸性内切几丁质酶基因启动子具有调控下游基因在花和种子中大量表达的特性。关键词：大豆；classIII酸性内切几丁质酶；启动子；克隆中图分类号：$565．103文献标识码：A文章编号：1007—9084(2013)

3、02—0221—04ExpressionpatternofsoybeanclassIllacidicendochitinasegeneandpromoterZHAOYan，SHAWei，JINZhong—rain，ZHANGMei-juan(KeyLaboratoryofGenetics，CollegeofLifeScienceandAgroforestry，QiqihaerUnive~ity，Qiqihaer161006，China)Abstract：TheexpressionpatternofsoybeanclassIIIacidicendoch

4、itinasegeneindifferentsoybeantissueswasdetectedbyreal—timequantitativePCR(RTQ—PCR)．Resultsshowedthisenzymeactivitywaslowerinroots，stemsandleaves，buthigherinflowersandseeds．5’一flankingupstream2O00bpsequencenamedCPofsoybeanclassIIIacidicendochitinasegenewasisolatedfromsoybeangeno

5、micDNAbyPCR．Sequenceanalysisre—vealedthatthisfragmentcontainedaseriesofmotifsrelatedtoseed——specificpromotersandsomepollen——ex·-pressedelements，suchasSEF4motif，E—box，G—box，(CA)，AACA，ACGT，CCAA，52一box，ntp303一box，GTGA，TACPyATbox．ItwasinferredthatCPpromotercoulddrivedownstreamgeneo

6、verexpressioninsoy—beanflowersandseeds．Keywords：Soybean；ClassIIIacidicendochitinase；Promoter；Cloning几丁质酶(chitinase)广泛存在于各种植物、动提高植物的抗真菌能力J。到目前为止，多种植物物及微生物的细胞和组织中，以几丁质为底物，可将中已克隆获得几丁质酶基因序列，如野生香蕉、其水解为寡聚糖，再进一步水解为N一乙酰氨基葡苜蓿J、白杨、蚕豆、小麦、水稻、甜菜、烟草、马铃萄糖J。根据Yeboah等的建议可将各种几丁质酶薯、棉花等。分为四类(class

7、I—IV)L2]。根据水解切口的位置不Yeboah等克隆了大豆中的几丁质酶基因序列，同又可分为：内切几丁质酶(endochitinase)和外切几并把该基因归为classIII酸性内切几丁质酶。本丁质酶(exdochitinase)。根据酸碱性，几丁质酶还有研究中根据大豆该基因序列，克隆其5’端上游酸性和碱性之分。植物细胞中不含有几丁质，却2000bp的序列。利用实时荧光定量PCR和生物信含有几丁质酶，大部分真菌的细胞壁中含有几丁质，息学方法继续对大豆该基因及其启动子的表达方式因此植物细胞中的几丁质酶能够催化真菌细胞壁的进行研究。重要成分几丁质的水解

8、，从而抑制真菌的生长增殖，收稿日期：2012-09—26基金项目：国家自然科学基金(31070180)；黑龙