大豆P39-1基因及其启动子表达方式的初步研究-论文.pdf

《大豆P39-1基因及其启动子表达方式的初步研究-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第32卷第3期大豆科学V01．32No．32013年6月S0YBEANSCIENCEJun．2013大豆9—1基因及其启动子表达方式的初步研究赵艳，赵丹，刘博，国春晖(1．齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江齐齐哈尔161006；2．吉林市第七中学，吉林吉林132011)摘要：利用实时定量PCR方法，检测大豆P39—1基因在大豆各组织中的表达方式，结果显示该基因在大豆根、茎、叶中的表达活性低，而在花和种子中的相对表达活性极高。利用PCR方法，克隆大豆P39—1基因5端上游2000bp序列，命名为P39—1一P。在线启动子预

2、测分析表明P39—1一P序列中含有多种典型的种子特异表达元件和花特异表达的元件，如SEF1motif、SEF3motif、SEF4motif、E—box、G—box、AACACA、AACA、ACGT、CCAA；52一box、ntp303一box、GTGA、TACPyATbox，推测大豆P39—1一P启动子具有调控下游基因大量表达在花和种子中的特性。关键词：大豆；P39—1基因；启动子；克隆中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2013)03-0425-04PreliminaryStudieson

3、theExpressionPatternofSoybean9．1GeneandPromoterZHA0Yan。ZHA0Dan，LIUBo，GUOChun．hui(1．CollegeofLifeScienceandAgroforestry，QiqiharUniversity，Qiqihar161006，China；2．JilinCityNo．7MiddleSchool，Jilin132011，China)Abstract：TheexpressionpatternofsoybeanP39—1geneinsoybeantissue

4、swasdetectedbyreal—timequantitativePCR(RTQ—PCR)．andtheresultshowedthatithadloweractivityinroots，stemsandleaves，whilehigheractivityinflowersandseeds．The5’-flankingupstreamsequenceofsoybeanP39—1gene，namedP39-1一P，wasisolatedfromsoybeangenomicDNAbyPCRmethod，andthelengt

5、hwas2000bp．Sequenceanalysisrevealedthatthisfragmentcontainedaseriesofmotifsrelatedtoseed—specificpromotersandsomepollen—expressedelements，suchasSEF1motif，SEF3motif，SEF4motif，E—box，G—box，AACACA，AACA，ACGT，CCAA；52一box，ntp303一box，GTGAandTACPyATbox．ItisinferredthatP39—1

6、-Ppromoterpossessesthefunc—tiondrivendownstreamgeneexpressionabundantlyinsoybeanflowe~andseeds．Keywords：Soybean；P39一lgene；Promoter；Cloning在转基因大豆中增加或降低某些物质含量，实(qRT-PCR)检测P39—1基因在大豆各组织中的表达现外源目的基因在转基因大豆中正常、有效表达，量；并克隆P39—1基因5端上游2000bp的序列，利首要考虑的问题是选择适合的植物启动子。组织用生物信息学方法对

7、P39—1基因启动子的表达方式特异性启动子能够调控下游基因的表达具有组织进行分析。特异性，避免造成植物营养不必要的浪费，因而成为当前研究热点。1材料与方法P39蛋白存在于多种高等植物中，如玉米J、水1．1材料稻、大麦、拟南芥和落花生等J，是蛋白凝胶电泳分大豆品种(吉豆2号)、大肠杆菌DH5均为本离卵磷脂过程中获得的分子量为39kDa的一种蛋实验室保存；RNAisoReagent试剂盒、逆转录试剂白质，该蛋白的N端具有保守氨基酸序列SDKEDS—盒、pMD18．T克隆载体、限制性内切酶HindllI、VFKGIN_3J。大豆中

8、的P39编码一个多基因家族，EcoRI、T4连接酶、ExTaq均购自Takara公司；引物包括P39—1、P39—2、P39—3、P39-4、P39-5和P39-6。2008年，Xiang等克隆了大豆的P39—1和P39—2两由上海生工合成；DNA凝胶回收试剂盒购自爱思进个同源基因，同源性