转基因大豆筛选的研究进展-论文.pdf

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1、综三刁合口研H，l究7转基因大豆筛选的研究进展孙炳君／武警山西总队后勤基地【摘要】在转基因植物中一个经常使用的标记基因就是卡那霉素抗性基因，它经常地在实验室用作区分转基因植物细胞和非转基因植物细胞的标记。卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素，其毒性机理是与植物细胞器叶绿体和线粒体中的核糖体30S亚基结合，从而阻止翻译过程干扰蛋白质合成，导致植物细胞死亡；而转化细胞获得了对抗生素的抗性，在一定浓度的选择性抗生素的选择培养基上存活下来，而非转化的细胞则因不含该抗性基因而被抑制或杀死。【关键词】大豆；转基因；筛选一、引言往往给检测工作带来误差，因此应以新生的三出复叶为检测对象，并转基因技术是将人]_分离和修

2、饰过的基因导入到目标生物体基因组适当提高卡那霉素处理浓度，以提高选择的准确性。再次，不同生中，达到改造生物体的目的，是利用遗传转化培育特有目标性状的植物育时期的新展叶对卡那霉素的抗性表现也不同，具体表现为生育时期新品种的一种方法，它包括把一个包含目标基因的外源核苷酸片段构建越靠后，新展叶对卡那霉素的抗性越强。因而利用卡那霉素涂抹进行在质粒载体中，然后转入植物细胞或组织，并使其在受体细胞或再生植转基因大豆检测，临界浓度的选择是个动态的过程，检测时期宜早不株中稳定保留和表达，最后通过有性或无性繁殖传递给后代。它可以扩宜迟。目前，利用PCR技术对转基因植株后代进行检测已成为转基大有用的目的基因的范围

3、，并可以创造出为人类所利用的新的物种材料。因植株检测的常规方法之一。本研究对经过卡那霉素涂抹检测的植株随着植物转基因研究的不断深入和规模化水平的不断提高，对转应用PCR方法进行进一步检测，结果表明，对卡那霉素表现高抗和基因植株的快速、大规模筛选提出了新的要求。为了便于选择，大多挠陛的植株卡那霉素涂抹检测结果与PCR检测结果的符合度达90．8％，数研究通常利用标记基因与目的基因的连锁关系，通过检测标记基因2种方法差异不显著；对卡那霉素表现感和高感的植株中有12．9％的的存在，间接证明目的基因的存在。植株仍能检测到nptII基因。分析其原因可能是，PCR检测手段是针二、叶片涂抹法筛选转基因大豆植株

4、对基因进行的，基因的存在并不表明其必然表达，而植株对卡那霉素以吉林小粒1号大豆为材料进行卡那霉素梯度涂抹试验，确定卡表现抗性是基因表达的结果，因而在卡那霉素检测的感和高感植株仍那霉素筛选的最佳浓度和筛选I临界观察时间，并在此基础上，对转基有可能存在nptII基因，只是由于基因沉默[11】等现象的存在，其并未因大豆植株(含nptII基因)分离后代进行卡那霉素涂抹检测和PCR检测，表达出目的蛋白，从而不能使这类植株获得卡那霉素抗性。卡那霉素检验2种方法的符合度。结果表明，卡那霉素的最佳筛选浓度为500mg／叶片涂抹方法简单易行，便于大规模筛选，可大大节省时间和成本。L，观察时间以3d为宜；抗和高抗

5、卡那霉素植株2种检测方法的符合本研究结果表明，通过选择合适的检测浓度和观察时间，利用卡那霉度为90．8％，感和高感卡那霉素植株的符合度为87．1％。可见，卡那素叶片涂抹法对大豆转基因植株后代进行快速筛选是可行的，能够初霉素叶片涂抹法完全可以用于大豆转基因植株的快速筛选。步识别转基因植株，确定研究重点，特别适合于对大量转基因后代植叶片变色反应标准的划分：参照朱加保等的方法，以叶片变黄株的初步筛选，当然，转基因植株的最终确定还需要Southernblot及程度为标准，对涂抹卡那霉素后叶片的反应进行分级：处理部位不Westernblot等检测结果的确证。变色，记为一级；处理部位稍有失绿，呈现差异，记

6、为二级；处三、卡那霉素对花粉管通道法转基因大豆的筛选研究理部位失绿与正常叶色差异明显，记为三级；处理部位严重失绿，花粉管通道法即指是利用花粉管通道导入外源DNA的技术，利用叶色转白，记为四级。植物受粉后花粉萌发，花粉管穿过花柱进入子房所形成的通道，将外源当筛选浓度≤200mg／L时，随着反应时间的延长叶片颜色几乎DNA导人受体胚囊转化受体合子胚的方法。它是由周光宇在8O年代建无变化，主要呈现一级反应；当筛选浓度为400mg／L时，大豆叶片立并在长期科学研究中发展起来的。利用花粉管通道法进行植物遗传转对卡那霉素的反应随时间的延长变化不明显，主要表现为二级反应，化，避免了植株再生的障碍，简便易行。

7、由于其特有的优点，在公认的因此若以此浓度进行筛选，会增加假阳性单株的数量，影响选择的难转化作物大豆中有着较为广泛的应用，并取得了成功。效果；当卡那霉素浓度≥600mg／L时，叶片颜色迅速变黄，甚至枯花粉管通道法由于其具有简便易行、避免植株再生障碍的优点，死。因此以500mg／L作为临界筛选浓度较为理想，在该筛选浓度下，在公认的难转化作物大豆中有着较为广泛的应用。但该法获得的大量叶片失绿明显，且随着