氯化锂作为转基因大豆筛选剂的研究-论文.pdf

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1、第31卷第4期大豆科学Vo1．3lNo．42012正8月SOYBEANSCIENCEAug．2012氯化锂作为转基因大豆筛选剂的研究黄文佳，李永光，王志坤，李维娜，王涛，王朋朋，李文滨(东北农业大学大豆研究所／东北农业大学大豆生物学教育部重点实验室／农业部大豆生物学与遗传育种北方区域重点实验室，黑龙江哈尔滨150030)摘要：以东农50大豆子叶节为材料，以大豆子叶节丛生芽黄化率和丛生芽高度为考察指标，确定氯化锂作为转基因大豆筛选剂的最佳浓度和筛选临界观察时间。在此基础上，对转基因大豆丛生芽进行GI／S染色，并对转化植株进行PCR检测。通

2、过对受体植株进行氯化锂叶片涂抹，确定适宜的表型筛选浓度。结果表明，延迟7d进行氯化锂筛选，筛选浓度为60mmol·L为宜，最佳筛选天数为10d。抗氯化锂丛生芽的GUS染色阳性率为80％，确定叶片涂抹法的适宜筛选浓度为700mmol·L‘。，并且经氯化锂筛选得到的转基因植株后代可以正常生长发育。关键词：大豆；转基因植株；氯化锂；GUS染色；PCR中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000—9841(2012)04-0552-05LithiumChloride，anAlternativeSelectableMarkerforS

3、oybeanTransformationHUANGWen-jia，LIYong—guang，WANGZhi—kun，LIWei—na，WANGTao，WANGPeng—peng，LIWen—bin(SoybeanResearchInstitute，NortheastAgriculturalUniversity／KeyLaboratoryofSoybeanBiologyinChineseMinistryofEducation／KeyLaboratoryofBi—ologyandGenetics&BreedingforSoybeaninNo

4、rtheastChina，MinistryofAculture，Harbin150030，Heilongjiang，China)Abstract：TheproperconcentrationoflithiumchlorideandselectiontimeweredeterminedbytheyellowingrateandtheheightofclusterbudsofDongnon~50．treatedwithdifferentconcentrationoflithiumchloride．Thedatashowedthesuitab

5、leselectiveconcentrationoflithiumchorideandtreatedtimewere60mmo卜L—and10day．respectively．Furtheranalysisrevealedthat80％ofclusterbudsresistanttolithiumchloridewaspositiveafterGUSdying．ThetransgenieplantsweredetectedbyPCRanalysis．Theresuhsuggestedtheoptimizedconcentrationof

6、lithiumchloridewas700mmol·Landthelineagesofthetrans—genicplantscouldnormallygrowanddevelop．Resuhssuggestedthattheselectedmarkeroflithiumchloridecouldbeappliedinrapidselectionfortransgenicsoybeanplants．Keywords：Soybean；Transgenicplant；LithiumChloride；GUSdying；PCRLi在诱导ACC合

7、成酶的产生和促进乙烯的合一种新的筛选标记，同时又能增加植物的耐盐能成方面起到主要作用。而高浓度的ACC合成酶和力，具有重要的意义。该试验以大豆GmCAX1基因乙烯会抑制植株生长，促进植株衰老⋯。从大豆中为筛选标记基因，氯化锂作为筛选剂，确定氯化锂分离的耐锂基因GmCAX1编码一种阳离q：／质子反作为转基因大豆筛选剂的最佳浓度和筛选临界观向运输体，从而降低植物对离子的敏感程度，减少察时间，为氯化锂作为筛选剂的应用奠定基础。Li对植株的伤害。l材料与方法选择标记基因在植物的遗传转化中起着非常重要的作用，传统的选择标记基因主要有抗生素基1．1

8、材料因和除草剂基因。大豆转化中较常用的包括新霉供试大豆为东农50，由东北农业大学大豆研究素磷酸转移酶基因(Ⅳ尸I1)，潮霉素磷酸转移酶基所提供；质粒pROK2．GmCAX1由中国科学院遗传因(HPT)和ba