拟南芥AtGPAT9基因cDNA的克隆及其转化大豆的研究-论文.pdf

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1、第31卷第6期大豆科学V0l-31No．62Ol2年l2月S0YBEANSCIENCEDec．2Ol2拟南芥基因cDNA的克隆及其转化大豆的研究吴兴，赵欢欢，张锋，李宏伟，王茅雁(内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特010018)摘要：甘油3一磷酸酰基转移酶(Glycero1．3．．phosphateaeyhransferases，GPATs；EC2．3．1．15)是植物种子中储藏性油脂三脂酰甘油(Triaeylglycerols，TAGs)合成中的一个关键酶，它催化甘油-3一磷酸分子sn一1位的酰化反应，形成溶血磷酯酸(Lysophosphatidicacid，L

2、PA)，从而起动TAGs的生物合成。拟南芥内质网中表达的AtGPAT9在此过程中可能起着重要作用。运用RT．PCR方法克隆到AtGPAT9基因的编码区cDNA，并构建了其植物表达载体，然后通过农杆菌介导的子叶节法对大豆进行了遗传转化，获得抗草丁膦(Phosphinothricin／PPT)筛选剂的再生植株。关键词：甘油一3．磷酸酰基转移酶；基因克隆；大豆转化中图分类号：s565．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2012)06-0878-04CloningofAtGPAT9cDNAfromArabidopsisandItsTransformationofSoy

3、beanWUXing，ZHAOHuan-huan，ZHANGFeng，LIHong·wei，WANGMao-yan(CollegeofLifeSciences，InnerMongoliaAgfieultur~University，Hohhot010018，InnerMongolia，China)Abstract：Glycerol-3一phosphateaeyhransferases(GPATs)playcrucialroleinthebiosynthesisoftriacylglyeerols(TAGs)whicharemajorformofthestorageoilsa

4、ccumulatedindevelopingseeds，andtheenzymescatalyzetheacylationofglycerol一3一phos—ph~teatthesn一1positionandresultintheformationoflysophosphatidieacid．whichistheinitialstepofTAGbiosynthesis．Theendoplasmicreticulum—expressedAtGPAT9，amemberoftheGPATfamilyinArabidopsisthaliana，waspredictedtoplay

5、anim—portantroleinthereaction．Inthepresentstudy，thecompletecodingregioncDNAofAtGPAT9wasclonedbyusingreversetranscfiptase—mediatedPCR，andthegene’splantexpressionvectorwasconstructed．Thensoybeantransformationwasper—formedbytheAgrobacteriumtumefaciens—mediatedcotyledonnodemethod，andtheregene

6、ratedplantsresistanttoselectivea-gentphosphinothricin／PPTwereobtained．Keywords：Glycerol一3一phosphateacyltransferases(GPATs)；Genecloning；Transformationofsoybean三脂酰甘油(Triacylglycerol，TAG)是植物种子为高油份植物J。目前在其基因组中共鉴定出9中主要的储藏性油脂，其生物合成是通过前体物甘个编码膜结合型GPAT的基因。，其中AtGPAT1主油一3一磷酸分子被脂酰辅酶A中的脂肪酰基连续酯要与花粉发育和种

7、子油份的组成有关，AtGPAT4、化而完成的。甘油．3一磷酸酰基转移酶(Glycerol一3一A和AtGPA1"8主要参与软木脂或角质的合phosphateacyhransferases，GPATs)可催化甘油_3一磷成⋯，其余几个基因的功能尚未见报道。AtG．酸分子sn．1位的酰化反应，形成溶血磷酯酸(Lyso—PAT9与其他8个拟南芥GPAT蛋白的同源性很低phosphatidicacid，LPA)，后者再经过连续2次酰化(3％的一致性和17％的相似性)，而与哺乳动物的反应而形成TAGs【lJ。因此，GPATs是TAGs生