大豆7S蛋白β亚基基因RNAi表达载体构建-论文.pdf

《大豆7S蛋白β亚基基因RNAi表达载体构建-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第31卷第6期大豆科学Vo】．31No．62012缸12月S0YBEANSCIENCEDee．2012大豆7S蛋白I3亚基基因RNAi表达载体构建戴嘉乐，马建，付永平，曲静，王丕武(吉林农业大学农学院，吉林长春130118)摘要：以大豆7S蛋白13亚基基因为靶基因(基因编号：AB030840)，利用RT—PCR克隆得到大豆7S蛋白B亚基基因核心序列398bp，构建了以抗除草剂基因BAR为筛选标记的安全植物RNAi表达载体BAR一7oLp—B。分子生物学检测表明7s蛋白B亚基基因的表达载体构建成功。研究结果为应用RNA干扰技术降低大豆过敏原，提高大豆蛋白品质奠定了基础。

2、关键词：RNA干扰；7S蛋白B亚基；表达载体中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2012)06．1021-03ConstructionoftheRNAiExpressionVectorofSoybean7SProteinIb．subunitGeneDAIJia—le，MAJian，FUYong—ping，QUJing，WANGPi—WU(AgronomyCollege，JilinAg,iculturalUniversity，Changchun130118，Jilin，China)Abstract：InthisstudyweusedB—s

3、ubunitgeneof7Sproteinasthetargetgenes(Genenumber：AB030840)，thenobtained398bpcoresequenceofp—subunitgenebyRT—PCRandconstructedRNAiexpressionsafeplantvectorBAR-7c~p一13，withaherbicideresistantBARgeneasselectionmarker．TheresultofPCR，molecularbiologydetectiondemonstratedthatgeneex—pressionve

4、ctorof7SproteinBsubunitwassuccessfullyconstructed．ThisstudyprovidedfoundationfortheapplicationofRNAinterferencetechnologytoreducesoybeanallergensandimprovequalityofsoybeanproteins．Keywords：RNAinterference；7Sprotein8一subunit；Expressionvector大豆的总蛋白含量约占其总质量的40％，是富含人体必需氨基酸的优质植物蛋白¨』。但是，大豆1材料

5、与方法蛋白也是一种抗原性极强的植物蛋白，其7S蛋白1．1材料及试剂中的B一伴大豆球蛋白在大豆总蛋白中占的比例较大肠杆菌DH5c~感受态菌株，BAR．7ap．NHZ．小，却是主要过敏原之一，可以引起婴儿及幼龄动3301基础表达载体由吉林农业大学生物技术中心物的消化道过敏反应引。B一伴大豆球蛋白是由、提供，引物由北京三博远志生物公司合成，DNA提’和B亚基按照不同的组合构成的，其中p亚基分取试剂盒购自康为世纪公司，RNA提取试剂盒，子量为52kD，由416个氨基酸组成。经研究证pMD18-TSimpleVector、TaqDNAPolymerase购自明B亚基也同样具有免

6、疫活性J。FaKaRa公司，琼脂糖凝胶电泳回收试剂盒购自Ax—培育相关蛋白亚基缺失品种是清除大豆蛋白ygen公司。致敏作用的有效措施。日本学者用Co叫照射得到1．2方法了B亚基单亚基缺失的品种J。同时也在自然界1．2．17S蛋白B亚基核心序列的克隆以大豆中发现B亚基缺失的大豆品种J。7S蛋白8亚基基因(基因编号：AB030840)为靶基RNA干扰(RNA干涉)是由与靶基因同源的双因，利用PrimerPremier5．0软件设计引物，通过链RNA诱导的转录后基因沉默现象，可以用于植DNAMAN进行酶切位点分析，选择适用的酶切位点物抗病性和抗菌性实验，也可以用于植物品质性

7、状加入引物序列(下划线所示为酶切位点序列)。的改良。本研究根据7S蛋白B亚基基因B亚基基因正义片段引物：AB030840的核心序列，通过RT—PCR和基因重组技P1：5GGGAAGCI’TTCAAACGCCATAGTG3，术构建了以BAR基因为筛选标记的安全植物RNAi酶切位点为Hindm；表达载体，以期为应用RNA干扰技术降低大豆过P2：5TTGGG1vrACCC1r]rrCITI1CCC1vrACTCC3，敏原，提高大豆蛋白品质奠定基础。酶切位点为Bste11；B亚基基因反义片段引物：收稿日期：2012433-09第一作者简介：戴嘉乐(1985)