血红素加氧酶-1重组载体的构建及在胃癌细胞中的初步研究

《血红素加氧酶-1重组载体的构建及在胃癌细胞中的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、医学分子生物学杂志，2010，7(4)：300-304JMedMolBiol，2010，7(4)：300-304DOI：10．3870／j．issn．1672—8009．2010．04．004血红素加氧酶一1重组载体的构建及在胃癌细胞中的初步研究王波，刘庆军，于景翠，尹玉静，魏旭冉，周虹军事医学科学院野战输血研究所北京市，100850哈尔滨医科大学第二临床医学院哈尔滨市，150081【摘要】目的构建人血红素加氧酶一1(hemeoxygenase-1，HO一1)及其突变体的真核表达载体，观察其在胃腺癌细胞中HO一1表达和活性变化，研究HO一1活性变化的胃腺癌细胞对顺铂抗药能力

2、的变化，为进一步研究HO一1对肿瘤细胞影响机制奠定基础。方法根据GenBank中HO一1cDNA序列设计引物，调取基因并克隆入pcDNA3．1(+)质粒中，构建表达人野生型HO一1与突变型HO．1(HO一1G143H)的重组质粒。脂质体介导重组质粒转染胃腺癌细胞BGC823，用RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞中HO一1mRNA的表达和蛋白表达水平，体外测定HO一1活性变化，应用Jib~fl进行体外抗药性实验。结果酶切鉴定和测序证实，HO一1真核表达载体构建成功；转染质粒后的BGC823，HO1的mRNA和蛋白的表达水平明显上升；转入野生型质粒的细胞HO一1活性

3、上升，转人突变型质粒的细胞HO．1活性下降；HO．1活性下降BGC823细胞抗顺铂杀伤能力增强。结论构建了HO一1野生型与突变型真核表达载体；将其转入胃腺癌细胞，引起了HO-1的mRNA和蛋白表达的增加和活性变化；体外实验表明，HO—l活性下降的BGC823细胞抗顺铂能力增强。【关键词】血红素加氧酶一1；肿瘤；基因重组【中图分类号】R73．3ConstractionofHemeOxygenase-1RecombinantPlasmidandIt’sResearchinGastricAdenocarcinomaCellWANGBo，LIUQingjun，YUJingcui，Y

4、INYujing，WEIXuran；ZHOUHongInstituteofTransfusionMedicine，AcademyofMilitaryMedicalSciences，Beifing，100850，ChinaTheSecondAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity，Harbin，150081，China【Abstract】0bjectiveToconstructeukaryoticexpressionplasmidsexpressinghumanhemeox-ygenase一1(HO．1)anditsmutantf

5、orstudyingtheinfluenceofchangesofHO．1expressionanden-zymaticactivityingastricadenocarcinomacel1．forstudyofthefoundationofHO．1andtumorcel1．MethodsAccordingtoHO一1cDNAsequenceinGenBank．ThegenefragmentofHO．1wasob．rainedbyPCRandclonedintoexpressionvectorpcDNA3．1(+)toconstructwildandmutantHO．1re

6、combinantplasmids．TheplasmidsweretransfectedintogastricadenocarcinomacellBGC823andwereconfirmedbyPCR，westernblotanalysis．T．heexpressionandenzymaticactivity0fHO．1wereexaminedandtheCisplatinresistanceofgastricadenocarcinomacellswithchangedH0．1wasobserved．ResultsTherecombinantplasmidsofHHO．1a

7、nditsmutantwereconstructedandidentifiedthroughsequencing．BGC823cellstransfectedwiththeplasmidsshowedelevatedex—pressionofHO—ltuRNAandprotein．WhiletheincreasedactivityofHO一1wereshowedincellstransfectedwithwildHO．1recombinantplasmid．andthedecreasewereshowedincel