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《重组肾上腺髓质素表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生理学报 ActaPhysiologicaSinica,February25,2003,55(1):71～7471研究论文重组肾上腺髓质素表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达3王小芳,邵 颖,田德志,姚 泰,陆利民复旦大学上海医学院生理与病理生理学系,上海200032摘 要: 为探索通过体内表达肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)治疗高血压和慢性心衰的可能性,本实验构建了重组AM真核表达载体,并在无内源性AM表达的K562细胞株上进行了体外表达实验。实验中采用RT2PCR技术扩增AMcDN
2、A片段,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA311真核表达质粒,构建成含AMcDNA的重组质粒pcD2NA311AM。用脂质体介导将该质粒转染培养的人白血病细胞K562株。在转染的细胞中,用RT2PCR检测证实有AMmRNA存在;用斑点免疫分析方法检测转染细胞的培养液上清,证实有AM多肽存在,表明本实验中构建的重组pcDNA311AM载体能够在哺乳类细胞中表达AM。关键词:肾上腺髓质素;K562细胞;基因表达;脂质体中图分类号:Q463;R33113ConstructionofpcDNA311AMande
3、xpressionofadrenomedullininmammaliancells3WANGXiao2Fang,SHAOYing,TIANDe2Zhi,YAOTai,LULi2MinDepartmentofPhysiologyandPathaphysiology,ShanghaiMedicalCollege,FudanUniversity,Shanghai200032Abstract:Thenewlydiscoveredendogenousvasodilatinganddiureticpeptideadr
4、enomedullin(AM)wasconsideredtobeofattractivevalueinclinicaltreatmentofhypertensionandcongestiveheartfailure.InordertoexplorethetreatmentofcardiovasculardiseasesbyexpressingAMinvivo,AMcDNAwasinsertedintomammalianexpressingvectorpcDNA311,andinvitroexpressio
5、nofAMwascarriedoutinculturedK562cellline.AMmRNAwasamplifiedbyRT2PCRfromthetotalRNAisolatedfromthea2drenalglandsofratsandwasinsertedintopcDNA311vectortoformpcDNA311AM,therecombinantpcDNA311AMwasthentransferredintoculturedK562celllinebyliposome.Theexpressio
6、nofAMinpcDNA311AMtransferredcellwasidentifiedbyRT2PCRanddotimmunoblotassay.Theresultsdemon2stratedthattherewereAMmRNAinthepcDNA311AM2transferredK562celllineandAMpeptidesintheculturingmedium,indicatingthattherecombinantpcDNA311AMvectorcanexpressAMinmam2mal
7、iancellline.Keywords:adrenomedullin;K562cellline;geneexpression;liposome 肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)是Kitamu2系统和中枢神经系统,具有舒张阻力血管、降低血[2][3]ra等人于1993年从手术切除的人肾上腺嗜铬细胞压、改善心脏收缩功能、利尿利钠等作用,从瘤(phaeochromocytoma,PC)组织提取物中发现的而被认为是在临床治疗高血压、慢性心功能衰竭等[1]一种生物活性肽。在体内,它广泛分布于心
8、血管多种心血管疾病中具有巨大潜在应用价值的一种内Received2002205214Accepted2002212202ThisworkwassupportedbytheFundsforGraduateEducationsponsoredbytheMinistryofEducation(No120010246012).3Correspondingauthor.Tel:+86221254237610;E2mail:lmlu@sh
