稳定转染pten基因后对卵巢上皮性癌细胞磷酸酰肌醇3激酶／蛋白激酶b信号传导通路的影响

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1、682生!第45卷第9期ChinJObstetGynecol，September2010．Vo1．45．No．9．基础研究稳定转染PTEN基因后对卵巢上皮性癌细胞磷酸酰肌醇3激酶／蛋白激酶B信号传导通路的影响翟永宁徐玲玲沈悦XIAHong沈宇飞【摘要】目的研究外源性PTEN基因稳定转染卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞后，对卵巢癌细胞磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)／蛋白激酶B(Akt)信号传导通路的影响。方法构建表达野生型PTEN基因的重组载体pcDNA3．1A—PTEN质粒，并转染卵巢癌细胞株HO．8910细胞(重组载体组)，以转染空载体pcDNA3．1A质粒(空载体组)作为

2、阴性对照，以未转染质粒(空白组)作为空白对照。采用逆转录(RT)PCR技术检测3组细胞中PTEN、Aktl、Akt2、PI3KmRNA的表达水平，蛋白印迹法检测3组细胞中PTEN蛋白的表达强度，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测3组细胞的生长情况[以吸光度(A)值表示，A值越大表示生长速度越快]。结果表达野生型PTEN基因的重组载体pcDNA3．1A-DTEN质粒，经测序证实构建成功。重组载体组细胞中PTENmRNA的表达水平为(17372±23)copy／ml，高于空载体、空白组[分别为(39±1)、(78±4)copy／m1]，差异均有统计学意义(P<0．05)；

3、重组载体组细胞中PTEN蛋白的表达强度也明显高于空载体、空白组。重组载体组细胞中Aktl、Akt2、PI3KmRNA的表达水平分别为(28±2)、(7±1)、(61±2)copy／ml，低于空载体[分别为(115±5)、(18±2)、(84±2)copy／m1]、空白组[分别为(77±4)、(17±2)、(1349±7)copy／m1]，差异均有统计学意义(P<0．05)。培养第5天，重组载体组细胞生长速度(A值)为90158±47，低于空载体、空白组(分别为148251±65、250115±62)，差异均有统计学意义(P<0．05)。结论转染表达野生型PTEN基因的

4、重组载体能有效提高卵巢癌HO一8910细胞中PTENmRNA和蛋白的表达，抑制细胞生长，并通过显著降低Aktl、Akt2、PI3KmRNA的表达水平，明显抑制PI3K／Akt信号传导通路。【关键词】卵巢肿瘤；PTEN磷酸水解酶；1一磷脂酰肌醇3一激酶；原癌基因蛋白质c—akt；信号传导EfectsofPTENover—expressiononphosphatidylinositol3-kinase／proteinkinaseBsignalpathwayinova~anepithelialcancercellsz，Yong—ning，Ling—ling，SHENYue，

5、XIAHong，SHENyDepartmentofGynecology，NanjingMaternityanddHealthHospital，ⅣrzngMedicalUniversity，Nang210004，ChinaCorrespondingauthor：SHENYu-fei，Emaif：shenyufei97@sohu．con【Abstract】ObjectivcToevaluatetheeffectofexogenouswildPTENgenestabletransfectedintohumanovariancancercelllineH0—8910onpho

6、sphatidylinositol3-kinase(PI3K)／proteinkinaseB(Akt)siganalpathwayandcellsproliferation．MethodsWild—typePTENrecombinanteukaryoticexpressionplasmidwasconstructedandthenwastransfectedintoHO一8910cellsbylipofectamine2000．TheexpressionofEN．Aktl，Akt2，PI3KmRNAandproteinofPTENweretestedbyreverse

7、transcription(RT)一PCRandWesternblot．TheproliferationofHO一8910afterwildIyrENgenetransfectedwasmeasuredbymethylthiazolvltetrazolium(MTT)．ResultsWild—typePTENgenewassuccessfullytransfectedintoH0—8910cells．TheresultsofRT．PCRandwesternboltshowedthattherewerethesignificantexpressionh