磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶b核因子κb信号通路在fsh促进卵巢癌细胞增殖和侵袭中的作用

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1、磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B核因子kB信号通路在FSH促进卵巢癌细胞增殖和侵袭中的作用河北省邯郸市屮心医院056001路晓琳女1984年11月，汉族，河北省邯郸市，单位：河北省邯郸市屮心医院；研宂方向：妇科肿瘤。【摘要】目的：综合分析磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（Akt}/核因子κB（NF-κB）信号通路在FSH（卵泡刺激素）促进卵巢癌细胞増殖和侵袭屮的作用。方法：选取在我院2015年2月-2016年2月收治的卵巢癌细胞患者临床资料42例作为研宄对象，分别培养卵巢癌细胞株（SKOV3细胞与

2、3A0细胞），随机分为FSH组与对照组，每组均为21例。采用MTT（四甲棊偶氮唑蓝）法检测10U/L、30LVL、70U/L、150U/L等不同浓度以及FSH不同处理时间10h、20h、48h、70hSKOV3细胞与3A0细胞增殖情况；采用体外侵袭实验检测两组SKOV3细胞、3A0细胞的侵袭能力。结果：FSH组与对照组SKOV3细胞与3A0细胞増殖在不同时间处理后的数据比较差异有统计学意义（P<0.05）,FSH组与对照组SKOV3细胞与3A0细胞侵袭能力比较有差异有统计学意义（P<0.05>。结论:FSH可能是通过PI3K蛋白激酶B信号通路调节卵巢癌SKOV3细胞、3A0细胞屮

3、核闵子κB的活性，实现对卵巢癌细胞的促增殖和侵袭作用.【关键词】PI3K；Akt；NF-κB；FSH；SKOV3细胞；3A0细胞磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B/核因子κB信号通路可以被很多胞外作用所机会，与此同时也可以调节更多的细胞功能，主要表现为：（1）转录功能；（2）翻译功能；（3）增殖功能；（4）生长功能；（5）存活功能［1-2］。磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B/核因子κB信号通路的异常机激活与诸多疾病密切相关，例如肿瘤与慢性疾病等。相关文献资料研究结果表明，蛋白激酶B的表达与卵巢癌的预后效果呈负相关关系，蛋白激酶B表达越高说明卵巢癌

4、患者的预后效果越差［3-4］。绝经后妇女体内的FSH是发生卵巢癌疾病的高危影响因素之一，FSH结合片段是人工合成的小分子多肽。一条FSH与卵巢细胞FSH受体相结合的片段，其相对分子量约为1201,属于FSH中的以下两个部分：（1）α链一—SARY;（2）β——TDSDS。笔者将根据相关工作经验，综合分析PI3K、Akt/NF-κB信号通路在FSH促进卵巢癌细胞增殖和侵袭中的作用。现报道如下。材料和方法1.1细胞株卵巢上皮性癌细胞株由北京医院妇产科实验室提供。1.2试剂MTT、Akt抗体、HYCLONE（胎牛血清）以及培养基（DMEM-F10）均购

5、自SIGMA公司，ECL发光剂购自cellsiginhing公司。1.3细胞培养SKOV3细胞、3AO细胞使用30%HYCLONE+300U/L青霉素+150U/LDMEM-F10培养液，置于36°C,3%CO2细胞培养箱中。将卵巢癌细胞以l×103个/ml的浓度种植于100孔板中,SKOV3细胞、3AO细胞在无抗生素的培养基中培养Id之后加入相同浓度的药物，严密观察SKOV3细胞、3AO细胞的增殖情况。SKOV3细胞、3AO细胞在无血清的培养基中培养2d之后经过不同浓度的FSH刺激收集患者细胞，采用蛋白印迹发进行鉴定Akt蛋白表达情况；经过不同浓度的FSH结

6、合片段刺激2d之后分别处理SKOV3细胞、3AO细胞lOmin、20min、40min、60min,使用蛋白印迹发鉴定Akt表达情况。1.4分析MTT当SK0V3细胞、3A0细胞处于对数生长期吋，经过胰酶消化后以l×103个/ml的浓度种植于100孔板中，每孔为160μL，每组5孔，等到无血清的培养液静置Id后加入各种药物处理2d后，在培养基中加入6g/L的30μLMTT,培养3.5h之后丢弃培养基，每孔加入160μLDMKE，溶解细胞代谢生成后的结晶，应用酶联免疫检测仪器在500nm波长检测其A值。1.5蛋白印迹法分析收集处理之后的细胞，按照传统方

7、法提取总蛋白，将50μg蛋白上样置于11%SFH-ENNA；电泳结束之后将250ma蛋白在2h之后转移到JBHG膜上，2%脱脂奶粉在常温下封闭60min后加入l:900Akt抗体中，洗膜2次之后，加入hlOOOAkt抗体中，孵育60min后加入TBST洗膜5次，每一次为12min，实验室重复2次左右。1.6细胞划痕法在体外培养的单层细胞上划痕致伤，再加入药物观察卵巢癌细胞的迁移过程，分析其侵袭能力。1.4统计学方法采用SPSS20.0统计学软件进行统计学分析，计量资料用(&