靶向abcg2的rna干扰逆转乳腺癌球囊细胞化疗耐药的研究

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1、8岭南现代临床外科2014年2月第14卷第1期LingnanModemClinicsinSurgery,Feb．2014,Vo1．14No．1靶向ABCG2的RNA干扰逆转乳腺癌球囊细胞化疗耐药的研究杨星胡倩丁林潇潇蒋君霞林潇姚和瑞【摘要】目的通过靶向ABCG2的RNA干扰逆转乳腺癌球囊细胞化疗耐药。方法以ABCG2为靶点，设计ABCG2．siRNA，构建ABCG2干扰慢病毒载体并包装好病毒，稳定转染到筛选好的MCF一7球囊细胞中，WesternBlot方法检测ABCG2的表达情况，M1rr法检测RNAi沉默ABCG2基因对球囊细胞的增殖抑制作用，同时流式细胞术检测RNAi沉默ABCG

2、2对MCF一7球囊细胞在耐药情况下的细胞周期变化和凋亡状况。结果ABCG2干扰慢病毒载体成功构建并包装病毒，建立起ABCG2稳定沉默的MCF一7乳腺癌球囊细胞系。WesternBlot显示球囊细胞中高表达的ABCG2，在RNAi沉默后表达下降：M'IT结果显示．在5．Fu的作用下的MCF．7贴壁细胞抑制率高于MCF一7球囊细胞，而沉默ABCG2的MCF一7球囊细胞其抑制率会随着5一Fu量的增加而增高；流式细胞仪也显示球囊细胞大多处于Go／G。期，加入5一Fu和沉默ABCG2后，处于Go／G。期细胞数会增加，凋亡率会明显增加。结论乳腺癌球囊细胞高表达ABCG2蛋白，其5．Fu耐药性高于亲

3、本MCF一7细胞，沉默ABCG2后能够增加球囊细胞在5．Fu的作用下的细胞抑制率及凋亡率，从而逆转对5一Fu的耐药性。【关键词】乳腺癌；球囊细胞；ABCG2；RNA干扰；药物耐受中图分类号：R655．8文献标识码：A文章编号：1009—976X(2014)01—0008—05doi：10．3969／j．issn．1009—976X．2014．01．004RNAinterferencetargetingABCG2reverseschemotherapyresistanceinmamospherecellofbreastcancerYangXing，HuQian，Ding-LinXiaox

4、iao，JiangJunxia，LinXiao，YaoHerui．DepartmentofOntology，SunYat—SenMemorialHospital，SunYat—SenUniversity，Guangzhou510120，China．Correspondingauthor：YaoHerlt，yaoherui@163．com【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheefectofRNAinterferencetargetingABCG2geneonreversechemotherapyresistanceofmamospherecellofbre

5、astcancer．MethodsABCG2．siRNAsequencewasdesignedandinsertedintolentiviralvectorandviruswaspackaged，thenastableABCG2．silencedMCF一7mamospherecelllineswasestablished．TheexpressionlevelofABCG2wasdetectedbyWesternblot．TheproliferationwasmeasuredbyMrrassayinMCF一7mamospherecellsafterRNAinterference．Flow

6、cytometrywasperformedtoassessthecellcycleandapoptoticrate．ResultsWesternBlotshowedthatABCG2washighlyexpressedinthemamospherecells．andtheexpressiondecreasedconcurrentlyafterRNAisilencedABCG2．MITI’showedthatinhibitionrateofMCF一7adherentcellswashigherthanthatofMCF一7mamospherecellsofinthepresenceof5

7、一Fu．andtheinhibitionrateincreasedastheconcentrationof5一FUincreasedinABCG2．silencedmamospherecells．FlowcytometryalsoshowedthatmostmamospherecellswereinGG1phase，andthenumberofmamospherecellsinG1phaseandapoptosiswereelevatedwit