重组大鼠tshα亚基在大肠杆菌中表达的实验研究

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1、第16卷3期天津医科大学学报Vo1．16．No．33922010年9月JOURNALOFTIANJINMEDICALUNIVERSITYSep．2010重组大鼠TSH(It亚基在大肠杆菌中表达的实验研究陈猛，熊蔚俐，孙蓓，梁东春，郭刚，张镜宇(天津医科大学内分泌研究所，天津市激素与发育重点实验室，天津300070)[摘要】目的：通过构建重组大鼠TSHa链原核表达系统及表达产物的纯化工作，获得重组GST—rrTSHct融合蛋白，以备作为免疫原制备抗大鼠TSHa链的抗体。方法：提取大鼠垂体组织总RNA，RT—PCR扩增大鼠TSHo~链编码序列，构建pGEX一3X／TSHc~融合表达质粒转化人大肠

2、杆菌中进行诱导表达。亲和层析纯化重组蛋白并以SDS—PAGE及WesternBlot进行鉴定。结果：DNA序列分析表明重组pGEX一3X／TSHot质粒含有读码框正确的H链编码序列，纯化产物的SDS—PAGE及WesternBlot结果表明所获得的目的蛋白与预期分子量相符且可与抗GST抗体发生免疫识别。结论：成功获得重组GST—rrTSHc~融合蛋白，为下一步的抗体制备奠定了基础。[关键词]促甲状腺激素；链；表达；纯化；大鼠[中图分类号]Q7[文献标识码]A[文章编号]1006—8147(2010)03～0392—04PreparationofGSTtaggedrecombinantratT

3、SHctChaininE．coliCHENMeng，XIONGWei—li，SUNBei，LIANGDong—chun，GUOGang，ZHANGJing—yu(InstituteofEndocrinology，TianjinMedicalUniversity，KeyLabofHormoneandDevelopment，Tianjin300070，China)ABSTRACTob．iective：ToobtainrecombinantGST—rr1、SHo【proteinbytheconstructionofexpressionsystemofratTSHchaininEscherichia

4、ColifE．col)．Methods：ThecDNAsequenceencodingratTSHchainwasacquiredbyRT—PCRfromthepituitarytotalRNA．andtheexpressingplasmidpGEX一3X厂rSH0【wasconstructedtobeexpressedinE．coli．Thepurificationoftherecombinantproteinwasalsobeingaccomplishedviaafinitychromatography．Results：BoththerecombinantcloningplasmidpG

5、EM—T厂IH仅andtheexpressingplasmidpGEX一3X／TSHdwereconfirmedbyDNAsequencingofcontainingcorrectTSHaopenreadingflame．SDS—PAGEandWesternBlottingapprovedpropermolecularweightoftherecombinantGSTtaggedproteinanditsimmunereactivitywithanti—GSTantibody．Conclusion：TherecombinantproteinGST-rrTSHOliSsuccessfullyo

6、btainedandcanbeusedinfurtherexperimentforgeneratingantiratTSHOtantibody．KEYWoRDSThyroidstimulatinghormone；仅chain；Expression；Purification：Rat促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone，腺激素和TSH的含量来证实动物模型的建立是否TSH)是垂体前叶嗜碱细胞合成、分泌的糖蛋白激成功I1_1。检测大鼠血清中TSH不能采用临床上用于素，由仅链和B链两个亚基组成。若以大鼠为实验人TSH定量检测的试剂盒，此类试剂盒采用的是针动物来研究甲状腺疾病

7、，TSH的测定是必不可少对人TSH的抗体，若用于检测大鼠TSH则很可能造的。特别是选用大鼠制作甲状腺功能亢进和甲状腺成结果的不准确。但是，国内市场一直缺少专门针对功能减退的动物模型时，必须通过检测血清中甲状大鼠TSH的抗体或测定试剂盒。本实验通过构建大鼠TSHc~链的原核表达系统及表达产物的提纯_T基金项目天津市重巾之重项目(05YFGDsF027oo)作，成功获得重组GST—rrTSHa蛋白。鉴于此前本室作