蛋白酪氨酸磷酸酶基因启动子过甲基化与喉癌的关系.pdf

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1、蛋白酪氨酸磷酸酶基因启动子过甲基化与喉癌的关系白伟良李巍陈晓秋王铁!摘要"目的#探讨蛋白酪氨酸磷酸酶基因启动子过甲基化与喉癌的关系方法#采用过甲基化特异性和法分析喉癌喉癌组及正常喉组织对照组基因启动子过甲基化及其表达情况结果#喉癌组有例基因启动子过甲基化对照组未发现过甲基化对照组基因的高中低表达率及阴性率分别为和淋巴结转移组分别为和两组比较表达差异有统计学意义t病理高分化基因高中低表达率及阴性率分别为和病理低分化分别为和两者比较其表达差异有统计学意义t基因在喉癌组织中呈现低表达的例中有例出现启动子过甲基化呈现高表达的例中仅有例出现启动子过甲基化基

2、因高表达与低表达在启动子过甲基化率的差异有统计学意义t结论#基因启动子过甲基化是该基因在喉癌中失活的原因之一基因表达下降与喉癌淋巴结转移及病理低分化有关!关键词"喉肿瘤蛋白酪氨酸磷酸酶蛋白酪氨酸磷酸酶基因启动子过甲基化!中图分类号"!文献标志码"!文章编号"ttt肿瘤形成过程中抑癌基因的失活是一个重要酸酶的环节抑癌基因的作用值得广泛研究和深入探基因具有许多重要的讨染色体克隆的抑癌基因蛋白酪氨酸磷生理功能其表达下降与多种肿瘤病理分化及淋巴中国医科大学附属第二医院耳鼻咽喉科!沈阳"#结转移有关基因启动子区域有丰富的通讯作者$白伟良!$＠#岛结构探讨启

3、动子区域岛过甲基化已临床耳鼻咽喉科杂志年月第卷第期成为研究热点我们研究了喉癌基因启动要求按试剂盒说明书＞子过甲基化及其表达情况报告如下将每例标本的总反转录成在的资料与方法反应体系中加入卜标本临床资料卜卜上下游引物各选择年月～年月住院的喉鳞卜p上下游引物各卜聚状细胞癌患者喉癌组例男例女例年合酶灭菌蒸馏水条件首次卜卜龄～岁平均岁取距肿瘤以上变性然后正常黏膜做为对照对照组例手术取下的新鲜共次循环末次延长标本立即浸入液氮中后置于冰箱保电泳产物在琼脂糖凝胶上电卜存喉癌组按年喉癌分期标准进行诊泳溴化乙锭染色紫外灯下观察结果将凝断I期例H期例皿期例w期例其胶电

4、泳图像输入美国凝胶分析系统应用中淋巴结转移淋巴结转移组例高分化进行强度分析结果例中分化例低分化例全部患者术前均以同时扩增的内参照的表达强度为基准p未接受放疗和化疗表达强度按下式计算过甲基化特异性表达强度相对系数值p提取和亚硫酸氢钠修饰提取用值按比值大小将结果进行处理酚氯仿抽提法取卜用基因组修统计学处理饰试剂进行修饰步骤见说明书软件统计t为差异有统计学意应用在线软件义设计引物其中过甲基化引物结果基因表达与淋巴结转移及病理分化的上游关系下游非过甲基化引物预期的基因片段长度为p上扩增结果表明例标本p全部阳性游基因有例阳性且与预期片段大小相等下游反应体系

5、卜含模板特异性高但强度各不相同图对照组卜卜各引物基因的高中低表达率及阴性率分别为巯基乙醇和淋巴结转移组聚合酶反应缓冲液卜过甲分别为基化引物反应条件然后和两组比较表共次循环末次达差异有统计学意义t组织病理学分延长非过甲基化引物反应条件化水平不同基因的表达强度也不然后同表共次循环末次延长取卜扩增产物用琼脂糖凝胶上电泳紫外灯下观察并照相试剂来源总提取试剂公司美国聚合酶公司日本引物购自上海生物公司计算机软件设计引物序列～正常喉黏膜组织高表达～喉上游鳞状细胞癌组织其中～为低表达下游～为阴性扩增产物为p引物图喉鳞状细胞癌组织中的基因表达凝胶电泳图像上游下游喉

6、癌基因启动子过甲基化情况扩增产物为互补片段喉癌组有例过甲基化图对按试剂说明书提取每例标本总的照组未发现过甲基化基因按表达紫外分光光度仪测量所提取的纯度强度可分为高中低表达其中低表达与高表达过甲基化率之间差异有统计学意义t基因高表达率为低表达及阴性率表为低分化喉癌中基因高表达率为低表达及阴性率为与高表喉癌基因表达与病理分化的关系分化相比差异有统计学意义t例基因在淋巴结转移组及病理低分化组喉癌中表达高表达中表达低表达下降提示基因是一种重要的肿瘤抑制基分组例数阴性＞～t因其表达降低在喉癌的发生发展演进中起重要对照组作用喉癌组目前研究认为过甲基化是一种新

7、的基高分化因调控机制即基因序列不发生改变而基因表达受中分化影响过甲基化多位于岛而岛多低分化集中分布于基因端启动子区域基因启与低分化比较t动子区域有丰富的岛结构目前已在结肠癌胃癌子宫内膜癌中发现了基因启动子存在过甲基化现象并且该基因过甲基化可导致基因表达下降与肿瘤演进有关过甲基化特异性技术敏感性高特异性强假阳性少见我们采用法检测了喉癌中启动子的过甲基化状态发现喉癌组织中存在过甲基化现象喉正常组织中未发现过甲基化～喉鳞状细胞癌组织过甲基化阳性正常喉黏结果显示基因低表达喉癌组膜组织非过甲基化阳性空白对照过甲基化产织中过甲基化率为而高表达喉癌组物非过甲基

8、化产物织中过甲基化率为与低表达之间差异有图喉鳞状细胞癌和正常喉部组织中基因启统计学意义t这表明喉癌中动子过甲基化状态电泳图像基因启动子岛