砷暴露与ABCA1基因启动子区DNA甲基化的关系研究.pdf

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1、分类号：Q26单位代码：10346密级：学号：2015111010049硕士学位论文中文论文题目:砷暴露与ABCA1基因启动子区DNA甲基化的关系研究英文论文题目:TherelationshipbetweenarsenicexposureandDNAmethylationinABCA1genepromoterregion申请人姓名：周通指导教师：杨磊合作导师：宋杨专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：环境毒理学所在学院：生命与环境科学学院论文提交日期2018年3月砷暴露与ABCA1基因启动子区DNA甲基化的关系研究论文

2、作者签名:指导教师签名:论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：答辩日期：2018.6.6TherelationshipbetweenarsenicexposureandDNAmethylationinABCA1genepromoterregionAuthor’ssignature:Supervisor’ssignature:ExternalReviewers:ExaminingCommitteeChairperson:ExaminingCommitt

3、eeMembers:Dateoforaldefence：2018.6.6杭州师范大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得杭州师范大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：2018年6月7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解杭州师范大学有权保留并向国

4、家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权杭州师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：2018年6月7日签字日期：2018年6月7日致谢时间匆匆而过，三年的求学时光即将结束，写这篇致谢是向那些帮助过我的老师、同学、朋友及我的家人表示我最诚挚的谢意。首先感谢我的导师杨磊教授给予我的信任﹑支持和鼓励。他不仅在学业上给予了我悉心的指导和帮助，

5、同时也以他本人的刻苦勤奋，乐观向上，严谨治学，勇于探索的精神影响着我，更以他宽广的胸怀、渊博的知识、前瞻的目光以及敏锐的思路不断启发着我，使我顺利完成学业，同时也让我认识到在艰辛的科学研究道路上，应该踏踏实实走好每一步。在这三年的学习中，我还得到了杭州师范大学各领导和老师的关怀和支持。宋杨老师在我做课题期间都给于了关怀和支持，在此我表示深深的感谢，我还要感谢预防医学的谭晓华、徐晓玲等教授在这三年里给予我的无私关心和指导。从研究生入学考试开始到做课题期间，都最大程度的支持我，使我有足够的时间学习和实验，他们不仅任劳任怨地承

6、担了教研室繁重的教学工作，还创造了轻松愉快的工作氛围，时常让我忘记疲劳，在此向他们表示衷心的感谢！感谢我的师姐师兄们在百忙中牺牲个人休息时间，指导、鼓励我完成实验，感谢我的老师在试验中给于我的指导及帮助，感谢我的同学给我无私的帮助﹑鼓励和真诚的友情，也要感谢我的同学给予我的热情帮助和纯真友谊。还要感谢我的师弟师妹给于我的支持和帮助。最后，还要特别感谢我的父母家人，感谢你们在繁忙的工作之余，在生活上支持我、关心我，给予了我极大的精神支持。杭州师范大学硕士学位论文摘要摘要目的:探究砷暴露对巨噬细胞ABCA1启动子区DNA甲基

7、化改变和基因表达的影响，同时明确砷暴露对巨噬细胞胆固醇流出及细胞凋亡的作用。方法:分别以0µM、4µM、8µM、12µM次砷酸钠暴露THP-1巨噬细胞48h，抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理1h后与12µM次砷酸钠共暴露48h，CCK-8法检测细胞活性改变，流式细胞术DCFH-DA染色法检测巨噬细胞内氧化应激情况，激光共聚焦法检测细胞内NADPH氧化酶胞质组分p47phox在细胞内的定位，焦磷酸测序检测ABCA1基因启动子区DNA甲基化情况，实时定量PCR检测ABCA1基因在巨噬细胞内的表达情况，western检

8、测ABCA1蛋白在巨噬细胞内的表达情况。巨噬细胞加入50μg/mLox-LDL诱导48h以产生泡沫化巨噬细胞，然后油红染色法检测泡沫细胞内脂质富集情况，总胆固醇和游离胆固醇检测试剂盒检测胆固醇富集和流出情况。最后hoechst染色法、流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法检测巨噬细胞的凋亡情况。结果：THP