sca3mjd患者外周血atxn3基因启动子区dna甲基化水平的研究

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1、万方数据中图分类号基Z丝!垒UDC610硕士学位论文学校代码!Q§三3密级公开SCA3／MJD患者外周血ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平的研究Analysis0tA删3promotermethylationinperipheralbloodofSCA3／MJDpatients作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：王春荣神经病学神经退行性疾病与遗传病湘雅医院江泓教授论文答辩日期迦＆：￡：盔壁答辩委员会主席中南大学二0一四年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的

2、研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：趣学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，

3、可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：导师签名万方数据》本研究受下列项目资助国家重点基础研究发展计划(973计划)子课题(编号：2012CB517902)国家自然科学基金面上项目(项目编号：81271260)>本研究大部分工作在中南大学中国医学遗传学国家重点实验室和北京阅微基因有限公司完成万方数据摘要SCA3／MJD患者外周血ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平的研究目的：研究脊髓小脑性共济失调3型／马查多一约瑟夫病(spinocerebellarataxiatype3／Machado—Jo

4、sephdisease，SCA3／MJD)患者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)中ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平，研究ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平与CAG重复序列拷贝数、SCA3／MJD发病年龄及ATXN3基因mRNA表达水平之间的相关性。方法：共收集71个SCA3／MJD家系的141例患者作为本研究的病例组和112例健康个体作为对照组。采用密度梯度离心分离SCA3／MJD患者和正常人的PBMCs；采用重亚硫酸盐测序法(bisulfitegenomicsequenc

5、ingPCR，BSP)检测ATXN3基因启动子区2个CpG岛的DNA甲基化水平；采用T载体克隆测序检测SCA3／MJD患者ATXN3基因的CAG重复序列拷贝数；采用实时荧光定量PCR(real．timequantitativePCR，qRT．PCR)方法检测ATXN3mRNA的表达水平。结果：1．通过BSP技术验证了ATXN3基因启动子区2个CpG岛的甲基化水平，CpG岛1(距离转录起始位点较远)呈高甲基化水平，CpG岛2(距离转录起始位点较近)呈低甲基化水平。2．SCA3／MJD病例组ATXN3基因启动子区CpG岛1的甲基化水平较对照组明显

6、(82．61±3．97VS78．97±2．22，p=0．00)；所收集的71个SCA3,CMJD家系中，有7个家系的同一亲代有多个子代，且子代的CAG重复序列拷贝数相同，其中6个家系中发病年龄早的患者较发病年龄晚的甲基化水平偏高。万方数据3．SCA3／MJD病例组中，有CAG重复序列动态突变家系中的亲代较未出现动态突变家系亲代，ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平偏高(86．04±2．68VS80．04±2．8，p---0．00)。4．SCA3／MJD病例组与对照组的ATXN3基因mRNA水平无明显差异(O．51±0．25VS0．464-0

7、．19，p=0．27)，mRNA水平与ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平无相关性。结论：1．首次利用BSP技术验证了ATXN3基因启动子区2个CpG岛的甲基化水平，岛1呈高甲基化水平，岛2呈低甲基化水平。2．ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平与SCA3／MJD患者的遗传早现有关。3．ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平与SCA3／MJD患者的CAG重复序列不稳定性有关。图9个，表4个，99篇参考文献关键词：SCA3／MJD，ATXN3，CAG重复序列，动态突变，遗传早现，DNA甲基化分类号：R744．4II万方数据Analysiso

8、fATXN3promotermethylationinperipheralbloodofSCA3／MJDpatientsAbstractobjeetive：Tost