基于基因芯片的孕妇外周血清中DNA甲基化的研究

《基于基因芯片的孕妇外周血清中DNA甲基化的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、东南大学硕士论文中文摘要论文题目：基于基因芯片的孕妇外周血清中DNA甲基化的研究DNA甲基化是一种基因外修饰，不改变DNA的一级结构。它在细胞正常发育、基因表达模式以及基因组稳定性中起着至关重要的作用，是表观遗传学的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育及人类肿瘤发生中起着重要的作用。肿瘤细胞中的DNA甲基化控制失常，以致基因中散在的CpG位点甲基化水平普遍降低(促使原癌基因表达)，同时出现染色体区域性CpG岛高甲基化(抑癌基因抑制)。异常DNA甲基化通常发生在CpG岛，通常位于结构基因启动子的核心序列和转录起始点。近年来，关于DNA甲基化在肿瘤的诊断

2、、治疗及预后等方面的作用及意义的研究正深入展开。随着对甲基化研究的深入，各种各样的甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型的研究要求。基于生物芯片甲基化的检测方法发展为高通量DNA甲基化检测提供了技术平台和基础。Yan等2001年首先将以分子杂交为基础的微阵列技术应用于DNA甲基化检测中，这种方法是基于杂交的寡核苷酸微阵列。经过多年的发展，这些以基因芯片为基础的方法有了不小的进步，本论文旨在探讨基于基因芯片的快速，便捷，低成本，高通量的DNA甲基化检测方法。我们探讨了一种基于基因芯片的高通量的方法，同时检测多个基因的甲基化状态。DNA经亚硫酸氢盐修饰后，先通过随机引物

3、PCR的方法扩增，打碎后与芯片上固定的多个基因的探针杂交，之后将另一条与探针相邻一个位点(甲基化位点)的小片段杂交到PCR产物上，再通过Taq连接酶将这一片段与探针连接起来，最后杂交上通用引物作为荧光标记，这样就可以分析出多个CpG位点的甲基化状态。实验结果还通过经典的methylation．specificPCR(MSP)方法得到了验证。实验结果证明这种基于芯片的方法可以作为一种高通量的工具用于基因甲基化状态的分析。孕妇血清DNA的甲基化状态可能与妊娠状况有着密切的关系。我们以健康未孕妇女以及怀孕早期的孕妇为研究对象，运用新建立的高通量方法，分析了GABA、RAS

4、S、MGMT以及CDH等基因在怀孕初期的甲基化状态，妊娠与未妊娠血清DNA甲基化的状态有所不同。从而证实了血清DNA甲基化的状态与妊娠的状态有着密切的关系。结果表明DNA甲基化作为一种表观遗传学现象为无创性产前诊断提供了一条新的途径，为产前诊断的进一步发展打下了基础。通过实验研究表明，基因芯片作为一种高通量的基因检测分析手段，对于孕妇外周血清中DNA甲基化的分析具有重要的作用。因此我们相信经过进一步的发展优化，一定能将无创性产前诊断技术大力发展，而且对于相关疾病的诊断和筛选具有重要的价值，从而推动其在临床上的广泛应用。关键词：DNA甲基化基因芯片孕妇外周血清产前诊断

5、ABSTRACTTitle：Microarray-basedmethodtoanalyzeDNAmethylationofmaternalserumDNAmethylationiScloselyassociatedwithtranscriptionalinactivationofclassictumorsuppressorgenes．whichiSacommonfeatureinhumancarcinomas．Asthemethylationofthein．depthstudy,manykindsofmethodsforDNAmethylationanalysish

6、avebeendevelopedtomeettherequirementsofdifferenttypesofresearch．Methodbasedonmicroarrayprovidesatechnologyplatformandthefoundationforthedevelopmentofhigh·throughputDNAmethylation．In2001．hybrid-basedmicroarraytechnologyWasfirstlyusedinthemethylationofDNAbyYan，whichisbasedonthehybridolig

7、onucleotidemicroarray．Afteryearsofdevelopment，thesemicroarray—basedapproachshaveimprovedobviously．Tmspaperaimstofurtherexplorethefast，convenient，low-cost，high-throughput，microarray—basedDNAmethylationdetectionmethod．W．ehavedevelopedahigh-throughputmethod，DNAmicroarrays，foranalyzingth