乳腺癌患者rassf1a基因启动子区甲基化及临床

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1、乳腺癌患者RASSF1A基因启动子区甲基化及临床【摘要】目的探讨乳腺癌组织中RASSF1A（RASassociationdomainfamily1A）基因启动子区CPG岛甲基化状态及临床意义。方法用甲基化特异性PCR（MSP）检测40份乳腺癌组织和24份正常乳腺组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态。结果乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子区CPG岛甲基化率为45.0%（18/40），与正常乳腺组织比较差异有显著性(2/24)（P<0.05），但与肿瘤病理类型、患者年龄、有无淋巴结转移的差异无显著性（P>0.05）。结论RAS

2、SF1A基因启动子区在乳腺癌中发生异常甲基化，为乳腺癌的候选基因。　　【关键词】乳腺癌；RASSF1A基因；基因甲基化；甲基化特异性PCR　　PromotermethylationofRASSF1Ageneinbreastcancerpatientsanditsclinicalsignificance　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatethemethylationstatusoftheCPGislandsinthepromoterregionsofRASSF1Ageneandtoanalyzeitsclinic

3、alsignificanceinbreastcancerpatients.MethodsMethylationstatusofRASSF1Apromoteratchedbenigntissues.ResultsThefrequencyofpromotermethylationofRASSF1Ageneintumortissuesalmethylationphnodemetastasis.ConclusionOurfindingsshoethylationofCPGislandsinthepromoterareaofRASSF1Ainbreas

4、tcancer.SoRASSF1Agenemaybeoneoftheneoursuppressorgenes.　　【Keyainfamily1Agene;genemethylation;methylationspecialPCR(MSP)　　RASSF1A是RAS相关结构域家族基因1（RASassociateddomainfamilygene）的A转录产物，是一种与肿瘤相关的基因，该基因定位于染色体3p21.3区段，编码一组RAS效应蛋白［1］，已有报道显示RASSF1A基因在正常组织中广泛表达，但在肺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中却出现表达缺失

5、［2］。因此认为RASSF1A基因的失活可能与肿瘤的发生有关。乳腺癌是由乳腺导管上皮发生的恶性肿瘤，是妇女的常见恶性肿瘤之一，在我国，乳腺癌占女性恶性肿瘤的前二位。乳腺癌的发生机制尚不清楚，尚没有良好的治疗方法，有关人体乳腺癌组织中的甲基化状态与临床病理的关系较少见报道。随着表遗传学研究的发展，发现抑癌基因启动子区的甲基化是抑癌基因失活的主要机制之一。我们应用甲基化特异性PCR（MSP）检测乳腺癌组织RASSF1A基因启动子CPG岛甲基化状态，分析其与临床的关系，以期进一步探讨乳腺癌的发生机制并寻找乳腺癌治疗的新方法。　　1材料与方法　　1.

6、1标本乳腺癌标本40份(乳腺浸润性导管癌34份，乳腺浸润性小叶癌2份，导管内癌2份，小叶原位癌2份)，年龄24～71岁；对照标本为距肿瘤边缘2cm外正常组织24份，年龄25～68岁，标本均来自深圳北大医院病理科2005年1～11月保存的蜡块标本。经40g/L多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色确诊。患者术前未行放射治疗或化学药物治疗。所有病例均经组织病理学检查确诊。　　1.２试剂与仪器亚硫酸氢钠、氢醌Sigma公司,DNAzolReagent、hotstartaqDNA酶Invitrogen公司,）：F5′-GTGTTAACGCGTTGCGT

7、ATC-3′,R5′-AACCCCGCGAACTAAAAACGA-3′，扩增产物长度为94bp;非甲基化扩增引物（U）：F5′-TTTGGTTGGAGTGTGTTAATGTG-3′，R5′-CAAACCCCACAAACTAAAAACA-3′，扩增产物长度为108bp［5］：引物由上海生工生物公司合成。PCR反应体为25μl,包括磺化修饰后的DNA2μl,10×buffer2.5μl,2.5mmol/LdNTP2μl,hotstartaq酶1U，上下游引物各0.8μl,去离子水补齐至25μl，PCR反应条件：95℃变性15min,94℃30s，

8、54℃40s，72℃30s，40个循环，72℃延伸10min，PCR产物置4℃待电泳检测，PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，Goldview染色后，紫外灯下观察结果。