乳腺癌患者血浆rassf1a基因启动子甲基化的意义论文

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1、乳腺癌患者血浆RASSF1A基因启动子甲基化的意义论文【摘要】目的：探讨乳腺癌患者血浆、肿瘤组织中RASSF1A基因启动子甲基化与临床病理等因素的相关性.方法：采用甲基化特异性PCR方法，分别检测68例乳腺癌患者血浆、肿瘤组织及癌旁腺体组织，以及12例良性乳腺疾病患者的血浆和乳腺组织中RASSF1A基因启动子甲基化状况.结果：乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化频率47.1%（32/68），患者血浆中同样DNA变异检出率33.8%（23/68）.血浆中DNA甲基化状况与乳腺癌组织的甲基化状况显著相关（r=0.906,P=0.001）.检测血浆中RASSF1A基因启动子甲基化的敏感性71.

2、8%，特异性97.2%，肿瘤组织及血浆中游离DNA甲基化异常与临床分期，病理类型，肿瘤大小.freelotermethylationoftumorsuppressorgeneRASSF1Ainplasmaandclinicopathologicalfeaturesofbreastcancer.METHODS:MethylationspecificPCReasurethepromotermethylationstatusinplasma，pairedtumortissueandparacancerousnormaltissueof68patientsaandmammaryglandof12pa

3、tientsoterhypermethylationortissueand33.8%(23/68)inpairedplasma.RASSF1Agenehypermethylationinplasmaortissue(r=0.906,P=0.001).ThesensitivityofRASSF1AgenehypermethylationdetectioninplasmaethylationofRASSF1Ageneintumortissueandplasmahadnocorrelationtopatientsage,tumorstage,tumorsize,histologicaltype,

4、ER,PR,andreceptorstatus(P0.05).NoaberrantmethylationofRASSF1Ageneasamplesfromthepatientstheonesethylationintumortissue.CONCLUSION:TheaberrantRASSF1Agenepromotermethylationinplasmaofbreastcancerpatientsissignificantlycorrelatedtothatinbreastcancertissue.【keys;RASSF1A;methylation0引言乳腺癌发生发展伴随着许多基因的改变，

5、其中包括了抑癌基因的失活，如基因突变、染色质丢失和启动子异常甲基化等.Ras相关区域家族1A（rasassociationdomainfamily1A,RASSF1A）是2000年发现的一种候选抑癌基因［1］，其失活在乳腺癌的发生发展中具有重要意义［2-4］.我们采用甲基化特异性PCR方法检测乳腺癌患者血浆、肿瘤组织和癌旁腺体组织中RASSF1A基因启动子甲基化的状况，并研究其临床意义.1材料和方法1.1材料经病理学检查确诊后进行手术治疗的乳腺癌患者68例，均未行术前化疗.包括乳腺癌改良根治术58例，乳腺单纯切除6例，乳腺癌根治术4例.对年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移、临床分期、雌性激

6、素受体、孕激素受体和cerbB2情况进行列表（表1）.同期采集10例乳腺纤维腺瘤和2例乳腺增生症患者的血浆作为正常对照.1.2方法术前采用BD真空采血管采集乳腺癌患者肘静脉血5mL，EDTANa2抗凝，于4℃条件下2000g离心10min，小心转移上层血浆至1.5mL离心管中，再于4℃条件下12000g离心10min，将上清以200μL/管分装后置-80℃冰箱中保存.术中取乳腺癌组织，距离肿瘤边缘5cm以上取癌旁腺体组织，分别标记于-80℃保存.血浆DNA抽提按照QIAampBloodMiniKit操作说明书进行.肿瘤及癌旁组织取50mg剪碎后研磨，加入组织裂解液500μL，50℃水浴1

7、h，再加入蛋白酶K至终浓度100mg/L，50℃水浴3h，用酚氯仿（体积比1∶1）和氯仿异戊醇（体积比24∶1）各抽提DNA1次，加入1/10体积乙酸钠和2倍体积的冰乙醇，沉淀DNA，加适量TE溶液溶解，紫外分光光度仪测定DNA浓度和纯度.分别取血浆DNA50μL(20μg/L)，肿瘤和癌旁组织DNA20μL(50μg/L)，溶于TE溶液45μL中，加入3mol/LNaOH5μL，至终浓度0.3mol/L