广西地区砷暴露人群p16基因甲基化水平的研究

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1、广西地区砷暴露人群P16基因甲基化水平的研宄1广两中医药大学第一附属医院分子生物实验室；2检验科广丙南宁530023【摘要】目的：探讨P16基因（MTS，multipletumorsuppressor1）CpG岛在广丙砷暴露人群中的甲基化状态。方法：用原子荧光分光光度计检测尿砷含量,Real-timePCR方法检测外周血血样中P16基因CpG岛的甲基化水平。结果：接触组尿砷浓度高于对照组，P16基因CpG岛的甲基化水平高于对照组。结论：长期砷暴露人群体内无机砷含量高于正常人，P16基因CpG岛的甲基化水平高于正常人。【关键词】紳暴露；P16基因砷（Arsenic）是一种广泛存在并有类

2、金属特性的元素，被认为人类致癌物［1］。有研究表明，砷暴露与健康效应之间存在明显的剂量-反应关系［2］。大量流行病学研宄和临床观察表明：iAs及其化合物与人类的皮肤癌、肺癌、肾癌等许多癌症有密切相关［3-4］。慢性砷中毒目前己经成为危害人类健康的一大公井卫生问题。木研宄以广两某冶炼厂员工作为砷暴露研宄人群，通过检测受试者血液样品中P16基因CpG岛甲基化水平，以评估其作为砷暴露人群前期预防在临床诊断应用中的可行性。1材料和方法1.1研究对象和实验材料1.1.1研究对象选取木研宄通过典型抽样方法共选取研宄对象男性50名，没有明显疾病，在治炼厂工作一年以上。再选取50名非冶炼厂工人（男性

3、）作为对照。1.1.2尿样采集在研宄现场用500mL—次性聚乙烯管收集空腹晨尿，于4°C下保存,并在一个月之内完成尿砷的检测。1.1.3血样采集在研究现场用5mL—次性EDTA抗凝管采集外周血，保存在4°C。2主要仪器和试剂DNA提取试剂盒（天根公司，中国），Real-timePCR试剂盒（天根公司，中国），荧光定量PCR仪（ABI公司，美国），双通道原子荧光光度计（北京吉天仪器有限公司，中国）。3实验方法3.1尿砷含量测定尿样中加入盐酸和高锰酸钾破坏其中的奋机物，再加入硫脲-抗坏血酸溶液将5价砷还原成3价砷，在氩氢焰中分解为单质态砷，测定荧光强度。3.2基因组DNA抽提及荧光定量P

4、CR按照Qiagen公司的基因组DNA提取试剂盒步骤操作。接着通过Chemicon公司的CpGGenomeDNAModificationKit将DNA进行亚硫酸氢盐修饰。PCR反应条件：95°C预变性lOmin，95°C变性15s，60°C退火/延伸lmin,共进行40个循环。最后用甲基化率（PMR）来表示甲基化水平。（引物序列见下表1）4统计学分析应用SPSS13.0软件对所有数据进行统计学处理。实验数据以均数±标准差（mean±SD）表示，计数资料采用百分率（％）表示，并用卡方检验。以P<0.05为差异有统计学意义。5结果1尿中

5、iAs的测定尿砷检测结果显示，接触组（职业性砷暴露工人）尿中iAs含量高于对照组（PC0.01）,差异有统计学意义。（见图1）讨论砷一种古老的原生质毒物，对人类健康均可造成严重的影响。砷暴露可引起皮肤癌、膀胱癌、肝癌、胃癌等多种肿瘤的发病率明显上升。在尿砷测定实验中发现，病例组尿砷含量显著高于对照组(P<0.01),提示病例组体内奋砷及其化合物的积累冇引起肿瘤的风险。P16基因是己知的抑癌基因，P16基因一旦出现甲基化水平升高，或可能引起细胞的恶性增殖。在本次实验中，我们发现砷接触组的P16基因CpG岛的甲基化水平高于正常对照组，这提示我们，长期接触砷及其化合物容易引起该基因甲基化水

6、平最高，进而诱发肿瘤的发生。参考文献：[l]WorldHealthOrganization.IARCMonographsontheevaluationofthecarcinogenicriskofchemicalstohumansVol.83[J].Lyon：InternationalAgencyforResearchonCancer，Tobaccosmokeandinvoluntarysmoking：IARC，2004,:59-94，275-279.[2】丫inJ，LiangD,VogelUetaI.ThepolymorphismofDNArepairgeneERCC2/XPDAr

7、gl56ArgandsusceptibilitytobreastcancerinaChinesepopulation.[J].BiochemicalGenetics,2009，47(7/8)：582-590.[3]Mei，C.，Hou,M.,Guo,S.etal.PolymorphismsinDNArepairgenesofXRCC1,XPA,XPC,XPDandassociationswithlungcancerriskinChinesepeople[J