卵巢癌组织中p16基因甲基化的研究

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1、卵巢癌组织中p16基因甲基化的研究【关键词】卵巢癌甲基化抑癌基因p16【摘要】目的探讨抑癌基因p16基因5’端CpG岛甲基化在卵巢癌癌变过程中的作用。方法应用甲基化特异性PCR（MSP）分别检测17例卵巢癌样本中p16基因启动子区域（M1/U1）以及启动子和第一个外显子5’端部分（M2/U2）的甲基化状态。结果在我们检测的17例卵巢癌样本中，有3例M1阳性，阳性率为17.65%（3/17），这些病例恶性度较低。无1例M2阳性。结论抑癌基因p16基因5’端CpG岛甲基化参与卵巢癌特别是恶性度低的卵巢癌的癌变过程，它可能与其它

2、抑癌基因协同作用。关键词卵巢癌甲基化抑癌基因p16Thestudyonthemethylationofp16geneintheovariancancersLuLina，WangHanping，HeHuiyi，etal.TheFirstPeople’sHospitalofGuangzhou，Gu

3、angdong510180.【Abstract】ObjectiveToexploretheactionofthetumor-suppressorgenep16DNAmethylationatthe5’endinthecarcinogenesisofovariancancers.MethodsMethylation-specificPCR（MSP）wasusedtodetectthep16genewithinpromoterregions（M1/U1）andwithintheregionsfrompromoterandthe

4、partialexon1at5’end（M2/U2）forDNAmethylationin17ovariancancersamples.ResultsThefragmentsofp16genebetweenM1/U1weremethyˉlatedin3samples（3/16）whichbelongedtolowmalignancycancers.NoneofsamplesshowedmethylationbetweenM2/U2.ConclusionThemethylationofthetumor-suppressorg

5、enep16maybeimportantforthedevelopmentofoˉvariancancers，especiallylowmalignancycancers.Itwouldbeinvolvedinthecarcinogenesisofovariancancerstogethˉerwiththeothertumor-suppressorgenes.Keywordsovariancancermethylationtumor-suppressorgenep16卵巢癌与其它恶性肿瘤一样是一种多基因病，在卵巢癌的发生发

6、展过程中，多个基因的分子变异起着至关重要的作用。p16是细胞周期的负调节基因，研究表明p16的基因变异如突变、纯合性丢失或5′端CpG岛甲基化等致使p16基因灭活，表达下调或缺乏，在恶性肿瘤的癌变过程中起到重要作用。大多数卵巢癌p16基因表达亦下调，但p16基因突变或纯合性丢失却较少发生;对卵巢癌p16基因甲基化的研究，则报道不一。对此，我们进行了探索，现报道如下。1材料和方法1.1样本来源随机抽取2000年1月～2001年6月我院卵巢癌手术病人17例，切除肿瘤病理结果分别为:浆液性囊腺癌6例;交界性浆液性囊腺瘤1例;内膜

7、样癌4例;未成熟畸胎瘤4例;颗粒细胞瘤2例。1.2甲基化特异性PCR应用甲基化特异性PCR（methylaˉtion-spectificPCR，MSP）分析p16基因5’端CpG岛甲基化状态，具体步骤如下。1.2.1DNA提取应用试剂盒QIAampDNAMiniKit（购自基因有限公司）提取卵巢癌组织DNA，操作按说明书。1.2.2引物的设计与合成本文研究p16基因5’端CpG岛甲基化状态［1，2］。我们采用不同的引物分析甲基化与非甲基化状态，M1/U1分析启动子区域（150bp）甲基化与非甲基化，M2/U2分析启动子和第

8、1外显子5’端部分区域（234bp）甲基化与非甲基化。所有引物均由大连宝生物工程有限公司合成。1.2.3DNA亚硫酸氢盐处理将卵巢癌组织DNA溶液20μl置95℃加热变性20min，加入新鲜配制的3MNaOH溶液5μl，置45℃20min;然后分别加入新鲜配制的0.1M氢醌12μl，3.6M亚硫酸氢钠2