tipe2过表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎滑膜成纤维样细胞及分析

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1、·1240中国免疫学杂志2013年第29卷doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2013．12．002TIPE2过表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎滑膜成纤维样细胞及分析石春燕何琼②杨晶晶庄国洪(厦门大学医学院抗癌研究中心，厦门361100)中国图书分类号R392．12文献标识码A文章编号1000-484X(2013)12-1240~5[摘要】目的：通过TIPE2表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎(AA)成纤维样滑膜细胞(FLS)，体外研究AA的发病中TIPE2对DR5介导细胞凋亡的作用。方法：应用MIGR1／TIPE2表达质粒，经脂质体法导入AA—FLS细胞中，转染72小时后．荧

2、光显微镜检测质粒自带GFP基因的表达情况确认转染效率，以未作处理的AA．FLS为对照组，用半定量逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)检测TIPE2mRNA的表达，用Westernblot法检测TIPE2蛋白的表达变化，MTI"法以及流式细胞术检测抗DR5功能性单链抗体ZF1对两组细胞生长的影响。结果：成功获得荧光强度90％的TIPE2过表达AA—FLS细胞，TIPE2mR—NA及蛋白表达显著提高。抗DR5单链抗体ZF1对TIPE2的FLS组细胞具有明显生长抑制及凋亡诱导作用，与不作处理的FLS组相比差异显著。结论：TIPE2表达质粒明显提升AA—FLS的TIPE2蛋白表达水平，TIPE2对D

3、R5介导细胞凋亡有重要作用。[关键词]类风湿关节炎；佐剂型关节炎；成纤维样滑膜细胞；DR5；TIPE2Fibroblast-likesynoviocytesfromadjuvantarthritisratweretransfectedwithplasmidover-expressedTIPE2anditsrelatedanalysisSHIChun—Yan，HEQiong，YANGjing—Jing，ZHUANGGuo—Hong．Anti—CancerResearchCenter，MedicalCollege，XiamenUniversity，Xiamen361100，China[Abst

4、ract]Objective：Fibroblast-likesynoviocytesfromadjuvantarthritis(AA)ratweretransfectedwithplasmidover—ex—pressedTIPE2．thenapoptosismediatedbyTIPE2onDR5anditspathologicalroleinadjuvantarthritis(AA)werestudiedinvitro．Methods：TheplasmidofMIGR1／TIPE2“weretransfectedtoAA—FLSbyliposome。after72h，theexpres

5、sionofGFPgenethatplasmidownedwasidentifiedbyfluorescencemicroscopeinconfirmtransfectionefficiency，TIPE2mRNAexpressionwasdetectedbysemi-quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT—PCR)，TIPE2proteinexpressionofAA—FLSweredetectedbyWesternblot．ThegrowthresistanceofcellsmediatedbyZF1(DR5

6、singlechainantibody)wasdetectedbyMTFmethodandflowcy—tometry．Results：Plasmidover—expressedTIPE2weretransfectedtoAA-FLSsuccessfullyasthefluorescenceintensityreached90％，TIPE2mRNAandproteinexpressionweresignificantlyimproved．Furthermore，thegrowthinhibitionandapoptosisinductioneffectonFLS／TIPE2”weresig

7、nificant，comparedwithFLSwithoutprocessing．Conclusion：TIPE2expressionlevelinAA—FLSaresignificantlyimprovedbytransfectingplasmidexpressedTIPE2，TIPE2playsanimportantpathologicalroleinapoptosismediatedbyDR5．[Keywords