骨性关节炎患者滑膜成纤维样细胞notch分子表达及作用的实验研究

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1、分类号UDCR392．12612编号!鲤9幽14008@江荨大擎论文题目硕士学位论文MASTER’SDISSERTATIoN作者姓名王慧指导教师筮查至量4熬拯答辩日期2Q!圣生Q鱼旦Q墨目分类号UDCR392．12密级公珏一．编号!Q2皇皇Z!Ql垒QQ墨硕士学位论文骨性关节炎患者滑膜成纤维样细胞Notch分子表达及作用的实验研究TheexpressionandpotentialroleofNotchmoleculesinfiboblast-likesynoviocytesfromosteoarthritis作者姓名：王慧指导教师：焦志军副教授小组成员：

2、王文红副教授汪毅副主任技师申请学位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2013年04月29日论文答辩日期：2013年06月08日学位授予单位：江苏大学，学位授予日期：2013年勿月答辩委员会主席：1晏力为教授评阅人：学位论文版权使用授权书／㈣江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供

3、查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密口学位论文作者签名：玄、蓼≥D鹃年占月f够日指导教师签名≯多年名月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：2藿、日期：即

4、房年易月膨El江苏大学硕士学位论文摘要研究目的：骨性关节炎(osteoarthritis，OA)是一种以关节软骨变性、破坏，关节滑膜炎以及骨质增生为主要病理特征的常见风湿性疾病。长期以来对OA的研究主要集中于关节软骨和软骨细胞，但是越来越多的证据已表明，滑膜的炎症反应在有症状的oA患者中普遍存在，而且与临床表现出的症状相关。有关研究发现，Notch信号途径不仅参与胚胎的发育，也参与了多种疾病的发生与发展。目前该信号途径与类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)等炎症性自身免疫性疾病的关系己受到越来越多人的重视。本研究的目的：建立滑膜细

5、胞原代培养方法并比较正常人与oA患者成纤维样滑膜细胞Notch受体在mRNA水平表达的差异。并进一步证实Notch信号在调节滑膜细胞分泌细胞因子及基质金属蛋白酶中所发挥的作用。通过本研究可望进一步明确oA的发病机制，并为发展基于干预Notch信号的免疫治疗提供理论依据。研究方法：(1)通过组织块培养法进行滑膜细胞原代培养，原代细胞传至3-5代，采用流式细胞术(FCM)检测成纤维样滑膜细胞(FLS)的纯度。(2)采用荧光定量PCR比较正常人与0A患者FLS的Notch受体mRNA水平表达，并以LPS(10ng／m1)或LPS(10ng／m1)+DAPT(5

6、um01)刺激OA患者FLS，通过荧光定量PCR和Western—blot方法检骨性关节炎患者滑膜成纤维样细胞Notch分子表达及作用的实验研究测Notch受体及其下游靶基因在mRNA及蛋白水平的表达。分析炎性刺激或DAPT非特异性阻断对OAFLSNotch受体的影响。(3)荧光定量PCR分析上述处理组0AFLS细胞因子IL一6，IL-8及基质金属蛋白酶mRNA水平的表达。采用流式芯片技术检测上述处理组细胞培养上清中细胞因子的表达，探讨Notch信号途径对OAFLS细胞因子及基质金属蛋白酶以及其分泌的细胞因子的影响。研究结果：(1)组织块培养法原代培养的

7、FLS传至第3代时可呈现典型的梭形形态：FCM检测到CD90在FLS上的表达率可达96．73％。(2)Notch4受体在正常人或0A患者FLS表达均较低，但OA患者滑膜细胞Notch受体1、2、3以及胁s●mR撇表达水平明显高于正常人(只0．05)。提示OAFLSNotch信号活化程度高于正常人，且经y一分泌酶抑制剂(DAPT)非特异性阻断后，与对照组相比Notch受体1、2、3以及胁s—JmRNA表达明显下降。(3)OAFLS可产生细胞因子IL-6和IL-8。同时，滑膜细胞也表达基质金属蛋白酶尤其以MMP3和MMP9为主。而经LPS刺激以后，Notch

8、信号明显活化同时，上述细胞因子与基质金属蛋白酶的表达也明显增高(尺0．05)；流