rnai抑制nanog表达对肝癌细胞hepg2中mdr1表达及阿霉素敏感性的影响

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1、第36卷第4期第三军医大学学报Vo1．36．No．43462014年2月28日JThirdMilMedUnivJan．282014文章编号：1000-5404(2014)04-0346—05RNAi抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中MDR1表达及阿霉素敏感性的影响周嘉嘉，陈汝福，邓小耿，周雨，周泉波，张杰，伍耀豪，曾乐祥，邱荣林(510120广州，中山大学孙逸仙纪念医院外科)[摘要]目的探讨抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中多药耐药基因1(muhidrugresistancegene1，MDR1)表达及阿霉素敏感性的影响。方法将靶向NANOG基因的特异性s

2、iRNA转染肝癌细胞HepG2，Real—timePCR和Westernblot检测siRNA沉默NANOG基因后NANOG、MDR1mRNA和蛋白的表达，平板克隆形成实验检测沉默NANOG基因后对细胞增殖能力的影响，流式细胞术检测沉默NANOG基因后对细胞周期的影响，CCK一8法检测沉默NANOG基因后HepG2细胞对阿霉素的敏感性情况。结果靶向NANOG基因特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2后，能有效抑制NANOGmRNA和蛋白表达，与Mock组比值分别为(0．32±0．05)和(0．38±0．08)；与Mock组比较，沉默NANOG基因后，细胞克隆形成率下降

3、[(8．51±3．63)％vs(17．13±2．24)％，P<0．05]，进入G0／G】期的细胞比例增多[(75．33±8．21)％vs(57．81-4-5．05)％，P<0．05]，HepG2细胞对阿霉素的敏感性增强(P<0．05)，HepG2细胞内MDR1mRNA和蛋白表达下降，与Mock组比值分别为(0．35±0．06)和(0．41-4-0．08)。结论抑制NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中MDR1的表达下调并增强细胞对阿霉素的敏感性。[关键词]肝癌；NANOG；阿霉素；多药耐药基因1；化疗敏感性[中图法分类号】R73—36；R735．7；R979．14[

4、文献标志码】ARNAiknockdownofNANOGinhibitsMDR1expressionandpromotesdoxorubicinsensitivityinhumanhepatomaHepG2cellsZhouJiajia，ChenRufu，DengXiaogeng，ZhouYu，ZhouQuanbo，ZhangJie，WuYaohao，ZengLexiang，QiuRonglin(DepartmentofSurgery，SunYat—seDMemorialHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou，GuangdongP

5、rovince，510120，China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofNANOGknockdownonmuhidrugresistancegene1(MDR1)expressionanddoxorubicinchemosensitivityofhumanhepatocarcinomaHepG2cells．MethodsTransienttransfectionofthespecificsiRNAtargetingNANOGgeneintoHepG2cellswasperformed．Theexpressiono

6、fNANOGandMDR1atmRNAandproteinlevelswasdetectedbyreal-timePCRandWesternblotting．TheinfluenceofNANOGknockdownoncellproliferationabilitywasexaminedbycolonyformationas—say．Theinfluenceoncellcyclewastestedbyflowcytometry．Thedoxorubicinchem0sensitivityofHepG2cellswasdetectedbyCCK一8assay．Resul

7、tsTransfeetionofthespecificsiRNAtargetingNANOGgeneintoHepG2cellscouldeffectivelyinhibittheexpressionofNANOGmRNAandprotein，withtheratioofsiRNAgrouptomockgroupof0．32±0．05and0．38±0．08，respectively．Comparedwithmockgroup，thesiRNA—mediatedsilencingofNANOGgeneinHepG2cellsresultedindec