华蟾素联合吉西他滨对肝癌hepg2细胞的抑制作用及对骨桥蛋白表达的影响

《华蟾素联合吉西他滨对肝癌hepg2细胞的抑制作用及对骨桥蛋白表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、华蟾素联合吉西他滨对肝癌HepG2细胞的抑制作用及对骨桥蛋白表达的影响：焦敏，南克俊，张茜，孙海凤，卢创新【摘要】目的探讨华蟾素、吉西他滨及华蟾素与吉西他滨联合对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡情况的影响，研究华蟾素作用HepG2细胞后骨桥蛋白(OPN)表达的变化。方法采用MTT法及流式细胞技术检测HepG2细胞对华蟾素、吉西他滨及华蟾素+吉西他滨的药物敏感性差异;采用免疫细胞化学法检测HepG2细胞中OPN的表达。结果华蟾素和吉西他滨单药或联合用药对HepG2细胞的增殖呈抑制作用且呈现时间与浓度的依赖性，并能诱导HepG2细胞凋亡，联合组凋亡诱导作用强于单药组(P<0.0

2、5);华蟾素能下调HepG2细胞中OPN的表达。结论华蟾素与吉西他滨联合对肝癌HepG2细胞具有协同抑制作用，可能通过抑制OPN的表达发挥抗癌作用。【关键词】肝癌;华蟾素;吉西他滨;骨桥蛋白;凋亡ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheantiproliferativeandapoptogenicactivitiesofcinobufotalin,gemcitabine(GEM)andcinobufotalin+GEMonHepG2cells,anddetecttheexpressionofosteopontin(OPN)aftertreatmen

3、tmunocytochemistryinecellularlocalizationandOPNlevels.ResultsCinobufacin,GEM,cinobufacin+GEMproducedtimeanddosedependentinhibitionofHepG2cells.Cinobufacin+GEMshoa;cinobufacin;gemcitabine;osteopontin(OPN);apoptosis　　目前，原发性肝癌是世界上发病率较高且较常见的恶性肿瘤之一。我国是肝癌发病大国，寻找低毒、有效、安全的药物仍是肝癌治疗的关键。中药治疗肿瘤在我国有悠久

4、的历史，其中华蟾素在我国广泛应用于临床，对于晚期肿瘤患者的疗效肯定。但是，华蟾素与其他药物的联合疗效及抗肿瘤的机制尚未完全明确。近年来，有证据显示骨桥蛋白(osteopontin,OPN)参与肿瘤的发生、发展。本研究旨在探讨华蟾素对肝癌细胞的抑制作用，及其对OPN表达的影响。　　1材料与方法　　1.1材料人肝癌HepG2细胞株由西安交通大学医学院中心实验室惠赠。RPMI1640培养液购自美国Hyclone公司;小牛血清购自中美合资兰州民海生物公司;鼠抗人OPN单克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司;SP免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥公司;华蟾素购自安徽淮北金蟾药业总公司;

5、吉西他滨购自江苏恒瑞药业;噻唑蓝(MTT)系美国Sigma产品。　　1.2细胞培养将HepG2细胞接种于100mL玻璃培养瓶中，在含体积分数100mL/L新生小牛血清的RPMI1640培养基中贴壁生长，于37℃、50mL/LCO2饱和温度培养箱中培养。细胞贴壁生长，每2～3d传代一次。取对数生长期细胞进行试验。　　1.3实验分组共分4组。根据文献资料及预试验结果分组如下：华蟾素组(H组)，包括H1、H2、H3、H4和H5共5个浓度点，其在培养中的终浓度分别为0.1、0.5、2.5、12.5、25mg/L;吉西他滨组(G组)，包括G1、G2、G3、G4和G5共5个浓度点，其在

6、培养中的终浓度分别为1.25、2.5、5.0、10、20mg/L;联合用药组(L组)，以相应的华蟾素浓度和吉西他滨浓度联合应用;空白对照组(O组)，不加药，以等量培养液代替。　　1.4MTT试验将对数生长期的HepG2细胞以2×104个/mL浓度200μL接种于96孔培养板上，RPMI1640培养基孵育24h后，倾去培养液。将不同处理组的药物分别加入孔内，每一浓度加4孔，每孔加200μL，对照组加等量培养液。孵育24h后，倾去药液及培养液，每孔加入5g/LMTT20μL培养4h，倾去药液及培养液，每孔加入二甲基亚砜(DMSO)150μL，平板振荡仪振荡100min，在250

7、0型酶标仪上以490nm波长检测各孔吸光度(A值)，根据A值计算抑制率，抑制率(%)=(1-A/A0)×100%。A：各药物浓度组光吸收值(均值)，A0：未加药物组(对照组)光吸收值(均值)。　　1.5流式细胞仪检测细胞凋亡情况将对数生长期的HepG2细胞调整浓度至2×105个/mL细胞悬液，以2mL/孔接种于6孔板，RPMI1640培养基孵育48h后，分别加入H3、G3、L组处理组药物，继续培养24h，收集各处理组HepG2细胞，用PBS洗涤细胞二次收集(1～5)×105个细胞，加入500μL的Bi