吉西他滨对慢粒细胞gcsfr及bcr2fabl+mrna的影响

《吉西他滨对慢粒细胞gcsfr及bcr2fabl+mrna的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、郑州大学2(X)9届硕士学位论文吉西他滨对慢粒细胞G-CSFR及伙习的】mRNA的影响吉西他滨对慢粒细胞G。CSFR及bcr/ablmRNA的影晌研究生刘丹导师孙玲郑州大学第一附属医院血液科郑州450052摘要目的:随着分子生物学的发展，核普类抗代谢物己经成为抗肿瘤药物研究的重要内容。吉西他滨(Gemcitabine，GEM)是一种新型的脱氧胞普类似物和核昔还原酶抑制剂，属抗代谢类抗肿瘤药物，目前已被广泛应用于实体瘤的治疗，因其疗效肯定，副作用小已被美国FDA批准为非小细胞肺癌、乳腺癌以及胰腺癌的一线化疗药。国外有关该药物对白血病的治疗尚处于基

2、础研究及临床试验阶段，国内偶见吉西他滨用于难治及复发淋巴瘤的报道，研究表明吉西他滨体外可诱导髓系白血病株HL一60细胞凋亡，抑制HL一60细胞系增殖。粒细胞集落刺激因子(graunloeyteeolony一stimulatingfaetor，e一esF)是一种重要的造血生长因子，它与粒细胞集落刺激因子受体(G一CSFre。eptor，G一GSFR)结合，通过复杂的信息传导系统，特异地调节粒系细胞的增殖与分化，并增强成熟粒细胞的功能，在机体应激防御系统中起重要作用。73十79%的造血干细胞及93%的造血祖细胞表面有G一CSFR的存在，且G一CSF

3、R的数量随着细胞的成熟而增加，因此，G一CSFR的表达在某种程度上反映了细胞的分化程度。人类成熟的粒细胞表面有200一I000R/细胞，而在幼稚细胞表面G一CSFR的数量相对较少，约为正常粒细胞的百分之一。慢性粒细胞白血病(ehroniemyelogenousleukemia，CML)病人的BCR/ABL融合基因高表达可以通过下调C/EBPalpha抑制骨髓祖细胞G一CSFR的转录，造成了CML病人骨髓细胞G一CSFR的表达率降低。G一CSFR表达率的下降能影响G一CSF生理效应的发挥，使细胞分化障碍;C/EBPalpha可诱导骨髓前体)郑州大

4、学2009届硕士学位论文吉西他滨对慢粒细胞G-CSFR及玩到ablmRNA的影响细胞向粒系分化，它的下调会阻止髓系分化，因此C/EBPalpha的下调和G一CSFR表达率降低可能导致CML患者骨髓粒系分化障碍，这可能是CML慢性期患者进入到急变期的诱因之一。本研究将吉西他滨作用于CML骨髓细胞，观察吉西他滨对CML患者骨髓细胞BCR/ABL融合基因mRNA及骨髓粒系G一CSFR表达的作用，为其可能作为新的CML治疗药物提供实验依据，探讨应用吉西他滨治疗白血病的可能性。方法:1.选择CML慢性期初治患者23例、CML急变期患者8例及正常对照组10

5、例，每例取骨髓液6ml制备骨髓单个核细胞悬液，分为吉西他滨组和未加药组，吉西他滨组加入吉西他滨，调整浓度为10“g/m1，用含体积分数10%胎牛血清的1640培养液培养，置于37℃，5%C了饱和湿度的孵箱中培养48h后收集细胞，未加药组接种于含体积分数10%胎牛血清的1640培养液(Gibc。公司产品)中，置于37℃，5%C扩饱和湿度的孵箱中培养48h后收集细胞。2.将收集的细胞进行以下检测:①流式细胞仪检测细胞表面G一csFR的表达;②逆转录聚合酶链反应检测bCr/ablmRNA的表达。3.所得结果应用SPSS13.o统计学软件处理，统计学数

6、据用均数士标准差(牙士s)表示，多样本均数的比较采用方差分析，以a=0.05为检验水准。G一CSFR表达率用均数士标准差(又士s，%)表示，同时采用直线相关性检验分析G一CSFR与bcr/ablmRNA表达水平之间有无相关性。结果:1.GeeCSFR在各组标本中的表达流式细胞仪检测显示:吉西他滨组CML慢性期、急变期患者骨髓粒系G一CSFR的表达分别为(50.72士8.57)%和(36.32士4.25)%，正常对照组G一CSFR的表达为(59.42士7.62)%;未加药组CML慢性期、急变期患者骨髓粒系G一CSFR的表达分别为(45.42士6.

7、52)%和(32.58士5.68)%，正常对照组G一CSFR的表达为(58.56士5.54)%。吉西他滨组和未加药组CML慢性期、急变期骨髓粒系G一CSFR的表达明显低于正常人(P<0.05)，CML慢性期患者高于急变期(P<郑州大学2砚X刃届硕士学位论文吉西他滨对慢粒细胞G-CSFR及bCrlablm丑NA的影响0.05)。吉西他滨组CML慢性期、急变期骨髓细胞G一CSFR的表达率高于未加药组(P<0.05)，该组正常对照组G一CSFR的表达率与未加药组无明显差异(P>0.05)。2.ber/ablIDRNA在各组标本中的相对表达水平逆转录聚

8、合酶链反应检测结果显示:反应产物经琼脂糖凝胶电泳后凝胶扫描成像系统照相，定性判断目的基因相对参照基因表达量的变化，电泳结果经凝胶扫描成像系统灰度扫描，