cyp3a39基因的克隆、表达及活性研究

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1、河南农业科学，2013，42(12)：124-128JournalofHenanAgriculturalSciencesCYP3A39基因的克隆、表达及活性研究薛正楷，叶彬，魏泓。(1．泸州职业技术学院生物医学工程研究所，四泸州646005；2．重庆医科大学分子医学与肿瘤中心，重庆400016；3．第三军医大学实验动物中心，重庆400038)摘要：为研究细胞色素氧化酶CYP3A39的生物学活性，采用RT—PCR方法从巴马小型猪肝组织中克隆CYP3A39基因，与真核表达载体pcDNA3．1连接，构建重组质粒，转染HepG细

2、胞，采用G418筛选，以获得稳定表达该基因的细胞株；以CYP3A特异性代谢底物睾酮为探针药物，在体外进行孵育，高效液相色谱仪测定睾酮羟基化产物6J3一羟基睾酮(6B—OHT)的产量。结果显示，成功克隆了CYP3A39基因，建立了稳定表达CYP3A39基因的HepG2细胞株，且其具有睾酮代谢活性。关键词：细胞色素氧化酶；CYP3A39；基因克隆；重组细胞；代谢活性中图分类号：$859．7文献标志码：A文章编号：1004—3268(2013)12—0124—05Cloning，Expressionand'ActivityAn

3、alysisofS．scrofaCYP3A39XUEZheng—kai，。YEBin。。WEIHong。(1．InstituteofBiomedicalEngineering，LuzhouVocationalandTechnicalCollege，Luzhou646005，China；2．ResearchCenterforMolecularMedicineandTum0r，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China；3．LaboratoryAnimalCenter，T

4、hirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400038，China)Abstract：TheCyPA39genewasclonedfromthe1ivertissuesofBamaminiaturepigbvRT—PCR，ligatedtotheexpressionvectorpcDNA3．1，andthentransfectedintoHepG2cells．TheHepG2CYP3A39cell1ine，stablyexpressingCYP3A39wasestablishedund

5、ertheselectionofgentamycin(G418)．Theprobedrugtestosterone(TST)specifictoCYP3AwasusedtoincubatewiththecelllinesofHepG2一pcDNA3．1andHepGz-CYP3A39inoptimalconditions，andthehighperformance1iquidchromatography(HPLC)wasutilizedtodetectthemetabolitesaftertheendofincubati

6、on．TheresultsShowedthatthecelllineexpressingCyP3A39wassuccessfullyestab—lishedandtheexpressedCYPaA39hadsignificantlyhighermetabolicactivityoftestosteronethanthatofnegativecontro1．Keywords：cytochrome；CYP3A39；genecloning；recombinantcelllines；metabolicactivity肝脏细胞色素

7、P450酶系(CYPs)是人及动物体外的小型猪品种有美国Minnesotahormel小型猪、内主要的药物代谢酶系，机体4O～5O％的药物是日本OhminiBud和Clawnmini小型猪以及德国由CYP3A代谢。CYP3A39是猪体内的细胞色素的Gottingen小型猪；国内的小型猪品系有贵州小氧化酶，由503个氨基酸组成，在药物代谢过程中具型猪、云南版纳微型猪、广西巴马小型猪和五指山小有重要的生物学作用_1]。型猪等[2]。巴马小型猪是我国广西地区特有的优良目前，国内外小型猪有2O多个品系或品种，国微型猪品种之一，是

8、极具人类和动物医学价值的临收稿日期：2013—07—23基金项目：国家“十五”科技攻关计划重点项目资助课题(2004BAT17B23)作者简介：薛正楷(1968一)，男，重庆永川人，副教授，博士，主要从事药物分子代谢与工程研究。E—mail：zk．xue988@163．corn第12期薛正楷等：CYP3A39基因的克