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时间:2017-12-08
《cyp3a39基因的克隆、表达及活性研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、河南农业科学,2013,42(12):124-128JournalofHenanAgriculturalSciencesCYP3A39基因的克隆、表达及活性研究薛正楷,叶彬,魏泓。(1.泸州职业技术学院生物医学工程研究所,四泸州646005;2.重庆医科大学分子医学与肿瘤中心,重庆400016;3.第三军医大学实验动物中心,重庆400038)摘要:为研究细胞色素氧化酶CYP3A39的生物学活性,采用RT—PCR方法从巴马小型猪肝组织中克隆CYP3A39基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组质粒,转染HepG细
2、胞,采用G418筛选,以获得稳定表达该基因的细胞株;以CYP3A特异性代谢底物睾酮为探针药物,在体外进行孵育,高效液相色谱仪测定睾酮羟基化产物6J3一羟基睾酮(6B—OHT)的产量。结果显示,成功克隆了CYP3A39基因,建立了稳定表达CYP3A39基因的HepG2细胞株,且其具有睾酮代谢活性。关键词:细胞色素氧化酶;CYP3A39;基因克隆;重组细胞;代谢活性中图分类号:$859.7文献标志码:A文章编号:1004—3268(2013)12—0124—05Cloning,Expressionand'ActivityAn
3、alysisofS.scrofaCYP3A39XUEZheng—kai,。YEBin。。WEIHong。(1.InstituteofBiomedicalEngineering,LuzhouVocationalandTechnicalCollege,Luzhou646005,China;2.ResearchCenterforMolecularMedicineandTum0r,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China;3.LaboratoryAnimalCenter,T
4、hirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstract:TheCyPA39genewasclonedfromthe1ivertissuesofBamaminiaturepigbvRT—PCR,ligatedtotheexpressionvectorpcDNA3.1,andthentransfectedintoHepG2cells.TheHepG2CYP3A39cell1ine,stablyexpressingCYP3A39wasestablishedund
5、ertheselectionofgentamycin(G418).Theprobedrugtestosterone(TST)specifictoCYP3AwasusedtoincubatewiththecelllinesofHepG2一pcDNA3.1andHepGz-CYP3A39inoptimalconditions,andthehighperformance1iquidchromatography(HPLC)wasutilizedtodetectthemetabolitesaftertheendofincubati
6、on.TheresultsShowedthatthecelllineexpressingCyP3A39wassuccessfullyestab—lishedandtheexpressedCYPaA39hadsignificantlyhighermetabolicactivityoftestosteronethanthatofnegativecontro1.Keywords:cytochrome;CYP3A39;genecloning;recombinantcelllines;metabolicactivity肝脏细胞色素
7、P450酶系(CYPs)是人及动物体外的小型猪品种有美国Minnesotahormel小型猪、内主要的药物代谢酶系,机体4O~5O%的药物是日本OhminiBud和Clawnmini小型猪以及德国由CYP3A代谢。CYP3A39是猪体内的细胞色素的Gottingen小型猪;国内的小型猪品系有贵州小氧化酶,由503个氨基酸组成,在药物代谢过程中具型猪、云南版纳微型猪、广西巴马小型猪和五指山小有重要的生物学作用_1]。型猪等[2]。巴马小型猪是我国广西地区特有的优良目前,国内外小型猪有2O多个品系或品种,国微型猪品种之一,是
8、极具人类和动物医学价值的临收稿日期:2013—07—23基金项目:国家“十五”科技攻关计划重点项目资助课题(2004BAT17B23)作者简介:薛正楷(1968一),男,重庆永川人,副教授,博士,主要从事药物分子代谢与工程研究。E—mail:zk.xue988@163.corn第12期薛正楷等:CYP3A39基因的克
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