食源性沙门氏菌pcr检测体系的建立及评估

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1、第3O卷第1期郑州牧业工程高等专科学校学报V0I．3ONo．12010年2月JournalofZhengzhouCollegeofAnimalHusbandryEngineeringFebruary2010食源性沙门氏茵PCR检测体系的建立及评估郑鸣，郑宝亮(郑州牧业工程高等专科学校生物工程系，河南郑州45001I)摘要：为建立食源性沙门氏菌实时定量PCR检测体系，实现快速检测。根据GenBank数据库鼠伤寒沙门氏菌的invA基因序列(AE008832)设计引物，建立沙门氏菌实时定量PCR检测方法

2、，通过标准曲线的建立和对4O份牛奶和4O份生肉进行检测评估检测体系的灵敏度和特异性。结果显示标准曲线相关系数为0．999，检出底限约8个细菌／反应。4O份牛奶和4O份生肉检测阳性率分别为2．5和5％，与传统细菌分离检测结果完全相符。实时定量PCR检测沙门氏菌具快速、灵敏的优点，适宜于食品中沙门氏菌污染的调查及监测。关键词：实时定量PCR；食源性致病菌；沙门氏菌中图分类号：S852．612文献标识码：A文章编号：1008—3111(2010)01—0008—04EstablishmentandEva

3、luationofReal·———timePCRforF00d—borneSalmonellaDetectionZHENGMing。ZHENGBao—liang(BiologydepartmentofZhengzhouCollegeofAnimalHusbandryEngineering，HenenZhengzhou450011，China)Abstract：AccordingtOtheinvAgene(AE008832)ofSalmonellafromGenBank，flpairofprimer

4、sweredesignedtOes—tablishareal—timequantitativePCRassay．Thecorrelationcoefficientofstandardcurvewas0．999andTheminimaldetectionlimitwas8bacteria／reaction．Detecting40milksamplesand4Omeatsamplesbyreal—timequantitativePCR，thepositiveratewas2．5％and5％respec

5、tivelyandtheresultswasidenticalwiththeresultsbyconventionalmi-crohiologymethod．Thus，thereal—timequantitativePCRiSmorerapid．sensitivethanothermethodsindetectingSal-monella，andiSapplicabletOinvestigateandmonitorSalmonellacontaminationinfood．Keywords：Rea

6、l—timequantitativePCR；Food-bornepathogenicbacteria；Salmonella沙门氏菌(Salmonella)是肠杆菌科中一种常序、检测时间、特异性检测等方面尚不理想荧光定见、重要的人兽共患病原菌之一，肉、蛋、奶等营养丰量PCR技术是近年来新出现的一种新的PCR检测富的食品是其主要传播媒介[1]。沙门氏菌污染不技术，其具有检测范围广、敏感度高、特异性好等优仅能导致鸡白痢、仔猪副伤寒、流产等动物疾病，还点而被广泛应用到微生物的检测[9~123，但在食源性能

7、使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物沙门氏菌检测中尚未见报道。本研究旨在建立一种中毒，给我国乃至世界造成了巨大的经济损失，同时快速、准确检测食品中沙门氏菌的方法，以提高对细还对人们的身体健康和生命安全构成了严重威菌性食物中毒突发公共卫生事件快速反应能力及加胁[3]，建立一种行之有效的食源性沙门氏菌的定入wTO对外食品贸易发展的新需要，在实现与国际检测技术接轨等方面具有重要意义。量检测方法，以提高对该菌的检验速度和准确性，使受污染的食品得到及时的处理，在公共卫生、食品卫1材料与方法生、畜牧兽

8、医和口岸检疫中都有重要的意义。1．1材料目前，沙门氏菌的快速检测方法主要有免疫酶1．1．1菌株试验中所用的沙门氏菌标准株甲型试验、免疫扩散法、乳胶凝集试验和免疫荧光法及酶副伤寒沙门氏菌(S．paratyphiA)、乙型副伤寒沙门联免疫吸附试验(ELISA)等[6卅]方法，但在操作程收稿日期：2O1O—O2—3O作者简介：郑鸣(1975一)，男，河南信阳人，讲师，在读博士。第1期郑鸣等：食源性沙门氏菌PCR检测体系的建立及评估9氏菌(S．paratyphiB)、猪霍乱沙门氏菌(S．c