食源性致病菌pcr检测策略的建立和优化-公共卫生专业毕业论文

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1、分类号：RIll单位代码：10422密级：公矸学号：．20胆J弓叩勿⑧■雾办耄硕士学位论文ThesisforMasterDegree(专业学位)论文题目：飧涌咐致南简R柱溺j磺酩自刁递兰乒仇们一rHl口TAB2-工JH朋芒√A肋Dm州]弘7工洲汐F肜欠Dt-T王_ClZO#jT阶，『否弓口F印9f；DJc2^／E蹭7H∞缈作者姓名盎蒸蟛培养单位生壁翌蔓豆整专业名称幺圭至笪至夤竺指导教师摩犀臣弛塑籀合作导师刀l万年扩月夕日万方数据1111111IIIILIIIIIII11111LIIll1111111I原创性声明Y2793390本人郑重

2、声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：邋日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和

3、汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)一：避翩虢斛万方数据目录中文摘要．1英文摘要．3缩写词及相关符号说明．5材料与方法．9结果一18讨{仑．．26结{仑．．36存在问题及不足37参考文献38致谢．．46攻读学位期间发表的学术论文47万方数据CONTENTSABSTRACTOFCHINESE．1ABSTRACTOFENGLISH．3ABBREVIATIONSANDINTRUCTl0NSOFRELATEDSYMBOLS．5PREFACE．．．．6MATERIALSANDMETHODS9RESULTS．。18DISCUSSl0N

4、．．26CONCLUSl0N36THEPROBLEMSANDDEFICIENCIES37REFEI迕NCES38ACKNOWLEDGMENTS．46PAPERSPUBLISHEDDURINGMASTER’SSTUDYYEARS．47万方数据山东大学硕士学位论文食源性致病菌PCR检测策略的建立和优化研究生：左慧彬导师：康殿民教授中文摘要研究背景通过该研究项目，利用PCR方法对14种引起食源性疾病(食物中毒)的致病微生物进行检测并获得其最佳PCR反应条件，根据每种食源性致病微生物PCR检测基因的引物的退火温度的高低以及扩增产物片段的大小将

5、其分组进行PCR反应条件的优化实验，使多个测试项目在同一批次进行PCR检测，从而大大缩减了检测时间，给现场疫情处理赢得时间。最终，建立一个快速、简便、准确、敏感、特异、有效的微生物检测平台，为突发事件现场调查处理及患者的治疗提供及时准确的信息和依据。研究方法从文献中查找部分食源性致病菌的PCR扩增引物序列，同时，在GenBank数据库中查找部分食物性致病菌的特异性基因序列，再依据特异性的靶序列使用Primer5．0软件进行引物设计。依据退火温度和扩增片段的大小对14种食物中毒致病菌进行分组，然后，对多重PCR和多项目同批次PCR的反应

6、条件进行优化实验。研究结果本文利用多重PCR和多项目同批次PCR技术对14种食物中毒致病菌进行了检测方法的研究，取得了以下成果：1．依据退火温度与产物片段大小将14种致病菌分成三组，使它们能够通过多项目同批次PCR一次性检测出来。分组方案如下，第一方案：(1)沙门氏菌、副溶血性弧菌、阪崎肠杆菌、奇异变形杆菌、空肠弯曲菌，(2)志贺氏菌、肠出血性大肠埃希菌0157、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、创伤弧菌、产气荚膜梭菌，(3)蜡样芽胞杆菌、溶血性链球菌、小肠结肠耶尔森菌；第二方案：(1)沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性万方数据山东大学

7、硕士学位论文弧菌、创伤弧菌、空肠弯曲菌，(2)肠出血性大肠埃希菌0157、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌、阪崎肠杆菌、奇异变形杆菌，(3)单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、溶血性链球菌、小肠结肠耶尔森菌。2．优化了多项目同批次PCR反应体系的退火温度、引物用量、灵敏度以及引物比例。多项目同批次PCR反应体系的最佳退火温度为52。C；最佳混合引物用量为0．6—0．8此；基因组DNA检测灵敏度可达到8x10qng／1．tL；第一方案致病菌的最佳引物比例分别为l：1：3：3：2，1：1：1：l：3：3，1：1：2；第二方案致病菌的最佳引物比

8、例分别为1：1：1：3：2，1：l：3：3：2，1：1：1：2。3．利用多项目同批次PCR反应体系的条件成功从3位食物中毒患者的呕吐物、腹泻物以及吃过的可疑食品样品中检出副溶血性弧菌。4．将常规PCR与多重PCR的灵敏度