水产品中4种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2015，46(12)：2217—2222ISSN2095—119l：CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．eomDOI：10．3969，j：issn．2095—1191．2015．12．2217水产品中4种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立童桂香，黎小正，韦信贤+，吴祥庆，黄国秋，谢宗升，黄光华，兰柳春(广西水产科学研究院，南宁530021)摘要：【目的】建立能同时检测沙门氏菌、大肠杆菌0157：H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR，为水产品质量安全检测工作提供技术支持。【方法】以LB肉

2、汤培养基为共增菌培养基，根据沙门氏菌invA基因、大肠杆菌0157：H7rr'bE基因、志贺氏菌西aH基因和金黄色葡萄球菌femA基因的保守序列设计引物，对引物浓度配比、退火温度及反应体系等进行优化，并对建立的多重PCR进行特异性、敏感性及临床样晶检验试验。【结果】4种目标致病菌在LB肉汤培养基中36℃培养18h后，均表现出良好的生长趋势，增菌数量级均在108CFU／mL以上。优化后的多重PcR能对4种目标菌的单一或混合基因组DNA进行特异性扩增，而对单增李斯特氏菌、肺炎克雷伯菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等其他菌株的基因组DNA均未扩增出任何条带；对沙f、J氏菌、大肠杆菌01

3、57：H7和金黄色葡萄球菌的最低检出限为10zCFU／mL，对志贺氏菌最低检出限为10CFU／mL。应用该多重PCR对56份水产品进行检测，其结果与按照GB／T4789．2003、GB／T4789．2010检测的结果一致。【结论】针对同时检测沙门氏菌、大肠杆菌0157：H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR具有快速、便捷、灵敏、准确等优点，可为水产品食源性致病菌检测及其安全控制行业提供一种快速、准确、高效、经济的检测手段。关键词：水产品；沙门氏菌；大肠杆菌0157：H7；志贺氏菌；金黄色葡萄球菌；多重PCR中图分类号：$917．1文献标志码：A文章编号：2095—1191(201

4、5)12—2217—06Establishmentofmultiplex—PCRmethodfordetectingfourfoodbornepathogenicbacteriainaquaticproductsTONGGui-xiang，LIXiao-zheng，WEIXin-xian+，WUXiang-qing，HUANGGuo-qiu，XIEZong-sheng，HUANGGuang-hua，LANLiu—chun(GuangxiAcademyofFisheryScience，Nanning530021，China)Abstract：【Objective】Therapidmuh

5、iplex—PCRmethodwasestablishedtodetectsimultaneouslyfourfoodbornepathogenicbacteriaviz．。Salmonellaspp．，Esehedchiacoli0157：H7，鼢igellaspp．andStaphvJococcusaureus，inordertoprovidetechnicalsupportforqualityandsafetydetectionofaquaticproducts．【Method】LBbrothmediumwasusedasell-richmentmediumtoculturef

6、ourfoodbornepathogenicbacteriaviz．，Salmonellaspp．，E．coli0157：H7，Shigellaspp．andS．auFeos．Meanwhile．fourpairsofprimersweredesignedformultiplex—PCRamplificationaccording10invasionproteingene(invA)ofSalmonellaspp．，perosaminesynthetasegene(棚锕)ofE．coil0157：H7，invasionplasmidantigenHgene(ipaH)ofShigel

7、laspp．andmethicillin—resistantassistedgeneA(femA)o_fS．aureus．Thenmainfactorsviz．．primercon—centrationratio．annealingtemperatureandmultiplex—PCRreactionsystemwereoptimized，andthespecificity，sensitivityandclinicalapplicationofestabl