饲料中霉菌毒素elisa试剂盒制作的研究进展

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1、2010年第14期中国饲料譬囊曩矗鬣强尊l÷鞋蕾聋g“鬻罄毒强一。一。曩蕾琵曩。。}l。≯}譬豫强。≯饲料中霉菌毒素ELISA试剂盒制作的研究进展湖南农业大学动物医学院郭成志袁慧【摘要]根据酶联免疫(ELISA)试剂盒的原理与研究现状，从人工抗原合成、单克隆抗体制备、试剂盒的反应条件优化、试剂盒技术参数的研究和试剂盒的组装等方面讨论研究过程中的基本操作及存在的问题．为广大科研工作者提供一些理论参考[关键词]饲料；霉菌毒素；ELISA试剂盒；研制[中图分类号]$816．17【文献标识码】A【文章编号]1004—3314(2010)14—0035—03【

2、Abstract]AccordingtothestatusandtheprincipleofdevelopingELISA-kits(enzyme—linkedimmunosorbentas—say)，thebasicoperationsandproblemswerediscussedfromtheartificialsynthesisofantigen，monoclonalantibodyprepa—ration，optimizationofreactionconditions，technicalparametersandthecompositio

3、nofkitindevelopingprocessofELISA-kits．Itwouldprovidesometheoreticalreferencesforthescientists．[Keywords]feed；mycotoxin；ELISA—kit；development饲料中霉菌毒素污染、肉类食品中抗生素和波长下测定OD值(吸光度)，计算样品浓度。目添加剂残留、农产品中农药残留等会给人畜健康前，一部分真菌毒素、抗生素、添加剂和农药已经带来严重的危害，因此引起了人们的高度重视(房有了商品化的检测ELISA试剂盒，有些已经有了祥军和邹晓庭，20

4、06；施杏芬等，2005)。对于这些较广泛的应用。研制快速检测这些小分子物质的物质，常用的检测方法为薄层色谱法、高效液相色ELISA试剂盒也已成为研究热点之一。本文将以谱法、高效毛细管电泳法、液相色谱一质谱联用饲料中的霉菌毒素为例，从以下几个方面探讨霉法、免疫测定法与免疫亲和色谱法等。这些方法具菌毒素ELISA试剂盒研制的基本过程及其中需有比较高的灵敏度，但是大部分方法前处理复杂、要注意的问题。操作过程繁琐、所需仪器设备比较昂贵，故不易大1霉菌毒素人工抗原的制备量推广使用。与以上方法相比，免疫学方法具有快对于霉菌毒素等小分子物质(分子质量小于速、灵敏

5、、准确、操作简单等优点，更加适用于大量400)而言，其不具有免疫原性，但具有反应原性，样品的同时、快速检测，所以建立酶联免疫吸附实故用此类物质免疫动物时不能够刺激动物机体产验ELISA检测方法将是一种很好的选择。ELISA生抗体，但是可以与相应的抗体进行抗体抗原反的基本原理为用纯化的抗体(或抗原)包被微孔应。自然界中，大多数具有较好免疫原性的物质，板，制成同相载体，往包被抗体(或抗原)的微孑L中其相对分子质量都在1万以上，小于1万者呈现依次加入标本或者标准品、生物素化的抗体、弱免疫原性，低于4000者一般不具有免疫原性。HRP一标记的亲和素，经过彻底

6、洗涤后用底物显但是，为了检测一些小分子物质(真菌毒素、抗生色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在素等)在食品、饲料、农产品以及畜禽产品中的残酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样留与污染剂量，需要建立一种简便快捷的方式。与品中的目标蛋白呈正相关。用酶标仪在(450nm)传统方法相比，ELISA法更具实用性。要建立ELISA法首先要有与其高度亲和的抗体。就必须基金项目：围家自然科学基金资助项目(30671548)要将霉菌毒素等小分子物质合成人工抗原之后，通讯作者才能够通过免疫动物获得特异性较好的抗体。人中国饲料2010年第14期工抗原的合成主

7、要是依据该物质所具有的特殊基靶向作用进行某些疾病的治疗等方面。小分子物团，然后选择其合理的合成方式。只有那些具有能质的单克隆抗体主要是通过其人工抗原免疫动物够与大分子物质基团结合的结构的物质，才能够后进行细胞培养，筛选出具有特异性反应的细胞合成人工抗原。这些大分子物质主要分为蛋白质株进行培养而获得的。单克隆抗体制备的基本流分子、多肽聚合物和大分子聚合物。但是，合成的程是：将经免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠骨髓瘤人工抗原仍要最大程度保持和突出待测物的特征细胞进行融合。筛选出阳性细胞株进行传代扩大性基团或结构．尤其是立体结构。否则，由这种抗培养．最后通过体外

8、或体内培养获取单克隆抗体。原诱导产生的抗体将不具有与原始分子的结构结单克隆抗体是否合适和抗体的亲和力是影响试