饲料中霉菌毒素检测技术ppt课件

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1、饲料中霉菌毒素检测技术交流提纲一、饲料中霉菌毒素的危害二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法三、ELISA法的操作要点及注意事项质量第一公正科学及时准确四、HPLC法在饲料霉菌检测中的应用一、饲料中霉菌毒素的危害1、什么是霉菌毒素？真菌霉菌抗生素霉菌毒素酵母蕈菌霉菌毒素是霉菌产生的次级代谢产物次级代谢产物一、饲料中霉菌毒素的危害2、霉菌毒素产生的原因霉菌无处不在，它们可在农作物生长、收获、运输和储存期间生长并产生毒素农作物作为饲料原料在生产、销售、储存、运输过程中如果受到霉菌污染也会发生霉变、遭受霉菌毒素污染一、饲料中霉菌毒

2、素的危害3、霉菌毒素的种类现已报道的霉菌毒素大约有300种在饲料中常见的、对人和动物健康造成潜在危害的毒素主要有：黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、伏马毒素和脱氧雪腐镰刀菌稀醇（呕吐毒素）等6种毒素一、饲料中霉菌毒素的危害4、霉菌毒素的主要危害一是可以引起饲料的变质，产生异味，降低其饲用价值，甚至完全让其失去商品价值二是饲料被霉菌污染后，导致畜禽的急、慢性中毒，免疫机能和生产性能下降，造成养殖业效益的下降三是残留于畜禽肌肉、内脏或乳中的霉菌毒素通过食物链传递给消费者，给食品安全带来更大的风险二、饲料中霉

3、菌毒素的主要检测方法3、主要检测方法的特点比较色谱方法ELISA试纸条样品处理复杂，需要净化柱纯化操作简单，只需萃取过滤简单，只需萃取过滤检测时间30-60分钟30-60分钟5-10分钟检测通量单个样品，一种或多种毒素多个样品，一个毒素单种样品仪器成本昂贵（HPLC,LC-MS/MS）便宜（酶标仪）无需仪器准确度高中低检测成本昂贵便宜便宜人员技术要求专业技术背景复杂的培训无需专业背景，简单培训无需专业背景，简单培训样品要求几乎可以处理任何样品对样品基质要求高对样品基质要求非常高检测效率可以进行多毒素检测只能完成单一毒素

4、检测只能完成单一毒素检测二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法4、检测方案胶体金阳性样确证高效液相液质联用荧光分析初筛ELISA√批量样本可疑样品二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法5、检测流程取样GB/T14699.12005饲料采样制样GB/T20195动物饲料试样的制备萃取净化（主要用于色谱法）分析测试三、ELISA法的操作要点及注意事项1、酶联免疫吸附（ELISA）试验的定义及分类定义：用酶标记抗原或抗体检测液体中未知抗体或抗原的方法。间接法将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未知抗体双抗体夹心法将已知抗体吸附

5、于固相载体，酶标记一抗检测液相中的可溶性抗原竞争法将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体检测液相中的可溶性抗原或抗体分类：三、ELISA法的操作要点及注意事项2、竞争ELISA的原理三、ELISA法的操作要点及注意事项2、检测步骤及注意事项（1）准备阶段详细阅读说明书确认试剂盒试剂组成、数量及其用途试剂配制试样的制备、提取及稀释试剂盒试用前要充分回温实验室室温最好控制在20-25℃准备好实验器具（移液枪机及枪头）确认仪器设备运行正常三、ELISA法的操作要点及注意事项2、检测步骤及注意事项（续）（2）加样标准

6、曲线孔---酶标抗原+标准曲线溶液样品测试孔---酶标抗原+样品提取物溶液注意事项：加样体积准确前后加样时间不宜过长不可漏孔、跳孔防止交叉污染三、ELISA法的操作要点及注意事项2、操作要点及注意事项（续）容易出现的问题解决方法加样时间过长，导致前后反应时间差异大一次检测不要检测太多样品加样使用使用单枪，其他步骤使用排枪先将酶标抗原和样品提取液在空白微孔板中混合均匀，再用多通道移液器将混合液加到检测微孔板中交叉污染枪头一次性使用试样加入后的步骤枪头不接触微孔液体挂壁排不尽使用硅化枪头移取体积不一致高质量移液枪+配套墙头

7、+人员操作训练产生气泡轻轻回形振荡三、ELISA法的操作要点及注意事项2、操作要点及注意事项(续)（3）孵育孵育前应混匀反应物严格按照说明书控制温度、时间及避光要求防止微孔内液体挥发，加以密封（4）洗板甩除液体要干净利落，不要投鼠忌器加洗液不要溢出微孔，防止交叉污染拍板用力适当，看不到明显液体为宜三、ELISA法的操作要点及注意事项2、操作要点及注意事项(续)（5）显色加显色液要快速准确回形振荡混匀，消除气泡严格按照说明书控制温度、时间及避光要求防止微孔内液体挥发，加以密封（6）显色终止按照加显色液的顺序及速度加终止夜

8、回形振荡混匀液体三、ELISA法的操作要点及注意事项2、操作要点及注意事项(续)（6）读数（检测吸光度）终止反应后应尽快检测吸光度按照说明书要求设置酶标仪参数三、ELISA法的操作要点及注意事项3、其他应注意的问题劳动安全保护及环境保护不同批次的试剂盒微孔板不要混用试剂盒质量差异（重复性、准确性）明显四、HPLC法在饲料霉菌检测中