2型登革病毒诱导raw264.7细胞凋亡的机制及凋亡对病毒复制的影响

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1、理杂志ChineseJournalofPathophysiology20()至丝·2245·[文章编号]1000—4718(2013)12—2245—062型登革病毒诱导RAW264．7细胞凋亡的机制及凋亡对病毒复制的影响木张林，黄俊琪(中山大学中山医学院免疫学研究所，教育部热带病防治研究重点实验室，广东广州510080)[摘要】目的：探讨2型登革病毒(DENV2)感染能否诱导RAW264．7细胞凋亡，并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法：用DENV2感染RAW264．7细胞，MTF检测细胞活性，Hoechst33

2、342染色检测细胞核变化，An-nexinV．FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，Westernblotting检测caspase一3和caspase一8活化片段的变化，比色法检测caspase．9活性变化，JC．1染色检测线粒体膜电位变化，Z—VAD—FMK抑制细胞凋亡后以TCID。检测感染细胞上清病毒滴度。结果：DENV2感染RAW264．7细胞24h、36h及48h后细胞活性受到抑制，免疫荧光检测有核固缩现象，流式细胞术检测发现病毒感染诱导了细胞凋亡，Westernblotting检测发现活化caspa

3、se一3和caspase一8的表达增加，caspase-9活性也增加，JC．1染色发现病毒感染诱导RAW264．7细胞线粒体膜电位降低，用Z—VAD—FMK抑制凋亡后感染细胞上清病毒滴度增加。结论：登革病毒感染可以通过内、外源性途径诱导RAW264．7细胞发生凋亡；凋亡发生抑制了病毒的产生。[关键词]登革病毒；细胞凋亡；RAW264．7细胞[中图分类号]R373．33[文献标志码】Adoi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．12．021Denguevirustype2inducesapop

4、tosisofRAW264．7cellsandefectofapoptosisonvirusreplicationZHANGLin，HUANGJun．qi(InstituteofImmunology，ZhongshanSchoolofMedicine，SunYet—senUniversity，KeyLaboratoryofTropicalDiseaseCon-trol，MinistryofEducation，Guangzhou510080，China．E—mail：huangiq@mail．sysu．edu．ca)

5、[ABSTRACT]AIM：Toexploretheapoptoticpathwayindenguevirustype2(DENV2)一infectedRAW264．7ceilsandtoanalyzetheeffectofapoptosisonvirusreplication．METHODS：RAW264．7cellswereinfectedwithDENV2．MTFassaywasusedtodetectthecellviability．ApoptosiswasassessedbyHoechst33342sta

6、iningandAnnexinV-FITC／PIstaining．Theexpressionlevelsofcaspase一3andcaspase-8weredeterminedbyWesternblotting．Theactivityofcaspase-9wasmeasuredwithacolorimetrickit．MitochondrialmembranepotentialwasevaluatedusingJC．1fluorescentstaining．TCID50wasusedtoestimatethein

7、fectiousvirionconcentrationafterusingZ—VAD—FMKtoinhibitapoptosis．RESULTS：TheviabilityofRAW264．7cellsdecreasedafterDENV2infectionat24h。36hand48h．Karyopyknosisindenguevirus．infectedceilswasobserved．Theproteinlevelsofcaspase一3andcaspase-8andtheactivityofcaspase一9

8、increasedintheap—optoticcellsafterdenguevirusinfection．Mitochondrialmembranepotentialwasreducedafterdenguevirusinfection．ThereWasahighervirionconcentrationinthecellcuhuremediumafte