尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL60细胞凋亡机制影响的研究

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1、尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL60细胞凋亡机制影响的研究【摘要】为了研究尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL60细胞凋亡机制的影响，采用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA凋亡带，用细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因bcl2、bax的蛋白表达。结果表明，实验组自培养8小时起琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA梯形凋亡带。Bcl2蛋白表达在各实验组随培养时间延长逐渐下降，而Bax蛋白的表达则逐渐增加，Bcl2/Bax比值逐渐下降，8小时就与对照组出现差异。结论：尼莫地平及阿糖胞苷均能促进HL60细胞凋亡，诱导其凋亡的机制与下调b

2、cl2及上调bax基因的蛋白表达有关。尼莫地平能加强阿糖胞苷促进HL60细胞凋亡，其机制与协同下调bcl2的表达有关。【关键词】尼莫地平阿糖胞苷凋亡HL60细胞系蛋白表达BclBaxEffectofNimodipineonMechanismsofHL60CellApoptosisInducedbyCytarabineAbstractTheaimwastostudythemechanismsofHL60cellapoptosisinducedbynimodipine(NMDP)andcytarabine

3、(AraC).TheDNAfragmentwasdetectedbyagarosegelelectrophoresis.TheexpressionsofbclandbaxgeneprotEinsrelatedwithapoptosiswereinvestigatedbyimmunohistochemistry.TheresultsshowedthatHL60cellapoptosisratehadbeenincreasingintheexperimentalgroupscomparedwiththecontr

4、olgroupsinceculturinghours.TheexpressionofBclprotEInwaslowerandtheexpressionofBaxproteinwashigherintheexperimentalgroupsthanthatinthecontrolgroup,whileratioofbcl2/baxwaslowerintheexperimentalgroupsthanthatinthecontrolgroup.ItisconcludedthatNMDPandAraCinduce

5、apoptosisofHL60cells,andthemechanismofapoptosisinducedbythemmaydownregulatetheexpressionofbclgeneandupregulatetheexpressionofbaxgene.ThemechanismofHL60cellapoptosisinducedbyAraCandNMDPisprobablyassociatedwiththedownregulationofBclproteinexpression.Keyw

6、ordnimodipine;cytarabine;apoptosis;HL60cellline;proteinexpression;Bcl2;Bax白血病多药耐药性(MDR)的产生是导致化疗失败的一个主要原因［1],凋亡相关基因bcl2、bax的表达与白血病耐药之间有着密切关系［2]。bcl2表达增高能使白血病细胞抵抗糖皮质激素、VP16、DNR、MIT、AraC、VCR、ADM和ATRA等化疗药物及X射线所诱导的凋亡，bax是调节bcl2肿瘤耐药的重要基因之一［3］。研究表明，钙通道拮抗剂尼莫地平(n

7、imodipine,NMDP)通过加强化疗药物诱导细胞凋亡而达到化疗增强作用［4、5］。NMDP是如何加强化疗药物诱导细胞凋亡的？其作用机制尚不明了。为此，本研究以人类早幼粒细胞白血病细胞株为研究对象，探讨尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL60细胞凋亡机制的影响，为临床合理用药提供理论依据。材料和方法细胞和主要试剂HL60细胞株引自武汉大学典型培养物保藏中心。NMDP购来自德国拜尔公司，AraC购自上海华联制药厂。RabbitAntiBcl2、RabbitAntiBax、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒均购自武

8、汉Boster公司。基因组DNA抽提试剂盒购自上海生物工程有限公司，DNA电泳marker购自TaKaRa公司。细胞培养和分组HL60细胞在含有10%新生牛血清的RPMI1640培养液中悬浮培养。每2-3天传代1次。实验前调整细胞浓度为5×105/ml。实验时将对数期生长细胞分为4组。A组：对照组；B组：HL60+NMDP组；C组：HL60+Arac