尾叶桉GLU4中4-香豆酰辅酶A连接酶基因克隆及原核表达-论文.pdf

《尾叶桉GLU4中4-香豆酰辅酶A连接酶基因克隆及原核表达-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、150广东农业科学2014年第l2期尾叶桉GLU4中4一香豆酰辅酶A连接酶基因克隆及原核表达陈博雯，潘俊霞，蔡文侠，付珊。，姜伟。(1．广西林科院广西优良用材林资源培育重点实验室，广西南宁530002；2．北京林业大学生物科学与技术学院，北京100083：3．广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530005)摘要：4一香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate：coenzymeAligase，4CL)是木质素合成中的关键酶，根据植物中4CL保守序列设计引物，以尾叶桉GLU4嫩茎为材料克隆到其4CL基因，命名为Eu4CL。该基因gDNA长5534bp，cDNA长l640bp，CDS

2、区编码544个氨基酸。Ⅱ4C核酸序列与GenBank已登录的桉属植物4CL基因同源性达到98％．与毛竹等其他科属植物4CL的同源性达77％以上，其编码的氨基酸序列经比对发现具有完整4CL结构域及AMP结合位点、CoA结合位点，与土肉桂等植物中4CL基因编码序列同源性也在79％以上，确定为4CL基因。对Eu4C编码蛋白序列理化性质及结构进行生物信息学分析，利用MEGA软件对基因序列进行系统进化树分析。采用DQE30／M15系统对Eu4C进行原核表达，重组质粒成功表达目的蛋白，分子量约60ku。本研究从尾叶桉GLU4中克隆得到Eu4CL基因并原核表达，为该基因的酶学分析以及利用该基因

3、转化调控尾叶桉木质素合成奠定基础。关键词：尾叶桉；4一香豆酰辅酶A连接酶；生物信息学分析；原核表达中图分类号：$792．39文献标识码：A文章编号：1004—874X(2014)12—0150—06Genecloni‘ngandprokaryoticCex：pressilonoOft4-coumarate：coenz’‘。CHENBo—wen一，PANJun—xia，CAIWen—xia，FUShah，JIANGWei。f1．GuangxiKeyLaboratoryofSuperiorTimberTreesResourceCultivation，GuangxiForestryRe

4、searchInstitute，Nanning530002．China；2．SchoolofBiologyScienceandBiotechnology,BeijingForestryUniversity,Beijing100083，China；3．CollegeofLifeScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning530005．China)Abstract：4-coumarate：coenzymeAligaseisakeyenzymeinligninsynthesispathway．A4CLgenewasclonedfromth

5、eyoungstemofEucalyptusurophyllacloneGLU4andnamedEu4CLusingspecificprimersbasedonthehighlyconservedsequencesofplant4CL．ThegDNAandcDNAsequencewere5534bpand1640bprespectively，whileCDSencoded544aminoacidresidues．Eu4CLhad98％sequencehomologywithEucalyptusthathadbeenloggedinGenBank，anditshomologywit

6、hPhyllostachysandotherswereover77％．Eu4CLencodingsequencewasanalyzed．theresultshowedithasanentire4CLdomain，anAMPbindingsiteandaCoAbindingsite，thehomologywithCinnamomumosmophloeumandotherswereover79％．Thephysicochemica1property，structureofEu4CLanditsphylogeneticanalysiswereanalyzedusingbioinfotr

7、eatiestoolsandMEGA．TheSDS—PAGEanalysisshowedthatEu4CLwastransformedintopQE30／M15systemandfusionproteinwithmolecularweightabout60kuwassuccessfullyexpressedintransformant．ThecloningandprokaryoticexpressionofEu4CLgeneprovidedeffectiveresourcesfo