酶解大豆蛋白产天冬氨酸蛋白酶抑制剂的研究-论文.pdf

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1、天然产物研究与开发NatProdResDev2012，24：1089—1093文章编号：1001-6880(2012)08-1089-05酶解大豆蛋白产天冬氨酸蛋白酶抑制剂的研究张国强，田亚平江南大学工业生物技术教育部重点实验室，无锡214122摘要：本文通过采用可控酶解的方式酶解大豆蛋白获得了一种源自大豆的天冬氨酸蛋白酶抑制剂SAm(soyaspartieproteinaseinhibitor)。酶解液经过DEAE-52阴离子交换层析、SuperdexPeptide10／300GL凝胶层析、SOURCE15RPC反

2、相层析分离后最终比抑制活力为254．2IU／mg，纯化倍数为62。SAPI对胃蛋白酶(3000U)半数抑制浓度Ic为25．67I~g／mL，有良好的热稳定性，属于一种非竞争性抑制剂。关键词：酶解；大豆蛋白；天冬氨酸蛋白酶；抑制剂中图分类号：Q503；Q502；11285文献标识码：ATheResearchofAsparticProteaseInhibitorsfromSoyProteinHydrolyzedbyProteasesZHANGGuo-qiang，TIANYa—pingKeyLaboratoryofIndu

3、strialBiotechnology，Min~tryofEducationJiangnanUniversity，Wuxi214122，ChinaAbstract：Inthispaper，wereposedakindofaspa~ieproteaseinhibitorfromsoyprotein(soyagparticpmteinageinhibi-tor，SAPI)aftercontrolledenzymatichydrolysis．Thefinalinhibitoryactivitywas254．2IU／mgan

4、dthepurificationfoldwag62afterDEAE-52ion—exchangechromatography，SuperdexPeptide10／300GLgelchromatographyandSOURCE15RPCreversed-phasechromatography．TheIC50valueofSAPIWag25．67mLtopepsin(3000u)，SAPIshowedgoodthermostabilityandbelongedtoakindofnon-competitiveinhibi

5、tor．Keywords：enzymolysis；soyprotein；aspartjcproteinase；inhibitor蛋白酶四大家族4。，即天冬氨酸蛋白酶、丝氨平[1等通过蛋白酶酶解大豆豆粕获得了两种ACE酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金属蛋白酶，通过特异抑制肽；钟芳¨等通过两种蛋白酶AS1．398和Al—性地水解不同的肽键控制着生物体内蛋白质合成后calase水解大豆分离蛋白制得水解度为10％～24％的结构修饰与功能释放，来规范生物体的生理活动，的大豆多肽，通过大孔树脂以及凝胶层析获得了3例如参与消化的胃蛋白

6、酶、调控血压的肾素、参与细个ACE抑制剂峰。胞内肽水解的组织蛋白酶D、水解酪蛋白的凝乳酶、本文采用可控酶解大豆蛋白的方式获得一种小艾滋病病毒蛋白酶等’6J。研究天冬氨酸蛋白酶的分子肽类天冬氨酸蛋白酶抑制剂，原料纯天然，来源抑制剂作为高血压、病毒传染、肿瘤转移、大脑进行广泛、酶解条件安全温和、工艺易于规模化放大，目性萎缩(Alzheimer~disease)等疾病的治疗方案有较标产品在医药保健和食品品质提升方面有较大的应高的医疗学价值L1引。天冬氨酸蛋白酶抑制剂还可用潜力。作为纯生啤酒、面粉加工等的品质改良剂。大豆蛋白

7、在大豆中含量38％左右，是谷类食物1材料与方法的4～5倍J。降解大豆蛋白有多种方法，每种方法1．1试剂与仪器获得的肽段的种类及组成不尽相同。目前，主要采大豆分离蛋白，购自安阳漫天雪食品有限公司；用化学水解法、酶解法、和微生物发酵的方法获得活胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶购自美国sigma公性多肽引，其研究成果集中在ACE活性抑制肽、抗司；风味蛋白酶购自诺维信公司；DEAE一52，美国氧化肽、降胆固醇肽、调节免疫肽等方面。吴建Amersham公司；AKTA纯化系统，GEHeahhcare医疗集团；高速冷冻离心机、真空冷

8、冻干燥机，日本日收稿日期：2012-02-06接受日期：2012-05-30立公司；MOS-450AF—CD圆二色光谱仪，法国Bio-}通讯作者E—mail：yapingtian@hotmail．com1090天然产物研究与开发LogicSAS公司。×4．6／／1111，5m)；流动相：A，20％乙腈(V／V)，1．2实验方法0．1％三氯乙酸(