萝芙木异胡豆苷-β-D-葡萄糖苷酶（SGD）基因的克隆与分析-论文.pdf

《萝芙木异胡豆苷-β-D-葡萄糖苷酶（SGD）基因的克隆与分析-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、安徽农业科学，JournalofAnhuiA．Sci．2012，40(19)：10006—10010责任编辑朱琼琼责任校对卢瑶萝芙木异胡豆苷-Ijl-D一葡萄糖苷酶(SGD)基因的克隆与分析许宏宣，常凯，马丽利，郑月，刘小强(西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆400715)，摘要[目的]对萝芙木异胡豆苷一B．D．葡萄糖苷酶(SGD)基因进行克隆与分析。[方法]以萝芙木为材料，采用RACE技术，从萝芙木中克隆SGD的全长cDNA，并对其进行表达谱分析和相关生物信息学分析。[

2、结果]萝芙木SGD基因cDNA全长1856bp，包含l608bp的开放阅读框，编码536个氨基酸，预测分子量为61kDa，等电点pI为6．16；生物信息学分析显示，RvSGD与蛇根木SGD及长春花SGD的序列相似性分别高达90．1％和70．9％，RvSGD也具有SGD蛋白的3个保守氨基酸催化位点His一161、Glu-207和Glu-419；荧光定量PCR表明，RvSGD在树皮中表达量最高，其次是老叶、根、嫩叶和茎。[结论]R~SCO基因的克隆和功能分析有助于在分子水平上更好地了解这个基因在TI

3、As的生物合成中的作用，并为今后调控TIAs的生物合成提供了新的靶点。关键词萝芙木；萜类吲哚生物碱；异胡豆苷一O—D一葡萄糖苷酶；克隆；表达谱中图分类号S567文献标识码A文章编号o517—6611(2012)19—10006—05CloningandCharacterizationoftheStrictosidine·D·glucosidase(SGD)GenefromRauvolfiaverticillataXUHong-xusnetai(KeyLaboratoryofEco—environ

4、mentsinThreeGorgesReservoirRegion，MinistryofEducation，SchoolofLifeSci—ences，SouthwestUniversity，Chongqing400715)Abstract[Objective]isstudyaimedtocloneScrictosidine·B—D-glucosidase(SGD)genefromRauvolfiaverticillataandanalyzeitschar-acteristics．『Method

5、]Thefu11一lengthcDNAofSGDwasclonedfromR．verticillatawithRACEtechnique．Thentlleexpressionlevelsindiffer-enttissueswereanalyzedwithquantitativeRT．PCRandthebioinformaticcharacteristicswerealsopredicted．1ResultlThefu11一lengthcDNAofRvSGDwas1856bp．containin

6、ga1608bpORFencoding536aminoacidswithacalculatedmolecularmassof61kDaandanisoelectricpointof6．16．BiointormaticanalysisrevealedthatRvSGDsharedhighsimilaritywithSGDsfromV／ncaroseaandRauvolaase~eminaatthea—minoacids：threeconservedcatalyticsitesHis161．Glu-

7、207andGlu-419werealsopresentedinRvSGD．QuantitativeRT—PCRshowedthatexpressionlevelofmSGDwasthehighestinbarks，followedbyoldleaves，roots，tenderleavesandtenderstems．『Conclusion]ThepresentstudywillbehelpfultounderstandmoreaboutthefunctionsoftheSGD女eneatth

8、e1evelofmoleculargenetics．andprovidenewtargetsforlno—lecularregulationofTIAsbiosynthesis．KeywordsRauvotfiaverticillata；Terpenoidindolealkaloids；Scrictosidine一8一D—glucosidase；Cloning；Expressionpmfile萝芙木是一类重要的药用植物，是夹竹桃科(Apocynace—类途径用来合成另一通用前体裂环马钱子苷(se