豇豆胰蛋白酶抑制剂的大量纯化和急性毒性研究-论文.pdf

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1、第41卷第6期卫生研究Vo1．41No．62012年11月JOURNALOFHYGIENERESEARCHNov．2O12889文章编号：1000．8020(2012)06—0889-06·论著·豇豆胰蛋白酶抑制剂的大量纯化和急性毒性研究宫照龙卓勤张敏吴景欢朴建华杨晓光中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室，北京100050摘要：目的用大肠杆菌大量表达豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白(CpTI)并检测其急性毒性。方法将重组表达载体pET41．CpTI转化大肠杆菌，用IPTG诱导目的蛋白表达，通过疏水层析和阴离子交换层析等色谱技术纯化大肠

2、杆菌表达的CpTI蛋白。取60只ICR小鼠，随机分成6组，每组10只，雌雄各半，经口灌胃法分别一次性给予10．0、4．64、2．15和1．00g／kgBW的重组CpTI蛋白，并设5．00g／kg的BSA对照蛋白组和水空白对照组，连续观察14d。结果所有的小鼠在观察期间体重、脏器比重、进食量等均未出现显著变化，在15d大体解剖也未发现明显的病理变化。小鼠对CpTI蛋白的最大耐受剂量(MTD)应大于10．0g／kgBW。结论在该试验条件下，经口灌胃法给予ICR小鼠CpTI蛋白，未发现其毒性。关键词：豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白纯化急性毒性实验食品安全性评价中图分

3、类号：Q556．9TS201．6文献标识码：ALarge-scalepurificationandacutetoxicityofcowpeatrypsininhibitorGONGZhaolong，ZHUoQin，ZHANGMin，WUJinghuan，PIAOJianhua，YANGXiaoguangKeyLaboratoryofTraceElementNutritionMOH，InstituteforNutritionandFoodSafety，ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention，Beijing1

4、00050，ChinaAbstract：0bjectiveToprovidetheacutetoxicitydataofcowpeatrypsininhibitor(CpTI)usingrecombinantproteinpurifiedfromE．coli．MethodsRecombinantCpTIproteinwasexpressedandpurifiedfromE．coli．BacterialrecombinantplasmidwastransformedintoE．coliandthetransformedcellswereinducedwi

5、thIPTG．TheexpressedCpTIproteinwaspurifiedbyhydrophobicinteractionchromatographyandanionexchangechromatography．Sixtymice，randomlyassignedto6groups，wereadministrated10．0，4．64．2．15and1．00g／kgBWofCpTIor5．00g／kgBWofBSAcontrolproteinorsterilewaterrespectivelybyora]gavage．ResultsAllani

6、malssurvivedwithnosignificantchangeinbodyweightandfoodconsumptionthroughoutthestudy．Macroscopicnecropsyexaminationonday15revealednogrosspathologicallesionsinanyoftheanimals．Themaximumtolerateddose(MTD)ofCpT1wasmorethan10．0g／kgbodyweightinmice．ConclusionNotoxicityofCpTIproteinwas

7、foundinICRmicemode1．Keywords：cowpeatrypsininhibitor，proteinpurification，acutetoxicitytest，foodsafetyassessment基金项目：转基因生物新品种培育科技重大专项资助(No．2011ZX08011-005)作者简介：宫照龙，男，博士后，研究方向：转基因生物的安全性评价1通讯作者：杨晓光，男，研究员，博士生导师890卫生研究第41卷豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpeatrypsinBapNA)购自Sigma公司。inhibitor，CpTI)是一种植源性的抗虫

8、蛋白，来源于1．1．3主要仪器Min—PROTEAN3Cell垂直电豇豆栽培品种加利福尼亚黑眼