油菜种子中胰蛋白酶抑制剂之纯化

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1、參考範本文章圖、表請隨文插入，勿分置二頁靠右對齊TimesNewRoman10最小行高18pt靠左對齊標楷體10最小行高18ptJournalofYuanpeiUniversityofScienceandTechnologyNo.10,December2003P.13～P.22元培學報第十期民國92年12月13～22頁油菜種子中胰蛋白酶抑制劑之純化置中標楷體24單行間距及特性分析TimesNewRoman16置中TimesNewRoman18固定行高23PurificationandCharacteriza

2、tionofaTrypsinInhibitorfromBrassicacampestrisSeeds洪志宏＊CorrespondingauthorChih-HungHungE-mail:chihhung@mail.yust.edu.tw黃兆君Chou-ChunHuangE-mail:chouchun@mail.yust.edu.tw蔡文翔Wein-ShiangTsaiE-mail:twspal@hc.ethome.net.tw王海龍Hai-LungWang標楷體16固定行高16ptE-mail:Hailun

3、g@mail.yust.edu.tw陳媛孃Yuan-LiangChenE-mail:yunliang@mail2000.com.tw元培科學技術學院醫事技術系TimesNewRoman10DepartmentofMedicalTechnology,YuanpeiUniversityofScienceandTechnology(ReceivedOctober29,2003;RevisedDecember3,2003;AcceptedDecember16,2003)新細明體10粗體邊界上2.5㎝下3㎝左右2.4

4、㎝左右對齊新細明體10固定行高16pt摘要：許多研究報告，癌細胞之產生、侵襲、轉移與蛋白酵素抑制劑有很大的關係，當外加蛋白酵素抑制劑或誘發內生性隻蛋白酵素抑制劑可以改善這些現象，故尋找及利用蛋白酵素抑制劑是極具研究意義。在本研究中，我們由油菜(Brassicacampestris)種子純化出一種胰蛋白酶抑制劑（Brassicacampestristrypsininhibitor,BCTI），並做了一般性質之探討，純化的過程是利用硫酸銨分割，經透析及活性分析，得知其活性介於硫酸銨分割20-50﹪之間，接著將樣

5、品通過DE-52cellulose陰離子交換樹脂及trypsin-Sepharose4B親和性管柱，所純化出之BCTI以SDS-PAGE分析，得知其分子量約8kDa，是屬於Bowman-Birk型蛋白酶抑制劑。進一步對此蛋白的性質研究，發現此蛋白對熱及變性劑(SDS)具有非常高的耐受性，90℃反應10分鐘，仍具有50%的活性；在0.5%SDS作用10分鐘，尚有40％的活性。還原劑DTT處理BCTI後，其抑制胰蛋白酶的活性喪失，故BCTI結構的穩定與雙硫鍵的存在有明顯的相關性。23關鍵字：Bowman-Bir

6、k型蛋白酶抑制劑、胰蛋白酶抑制劑、油菜英文內文左右對齊TimesNewRoman10固定行高16pt縮寫：BCTI，Brassicacampestristrypsininhibitor；BAPNA，(N-benzoyl-DL-arginyl-p-nitroanilide)；SDS-PAGE，sodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis.Abstract：Atrypsininhibitor(BCTI)waspurifiedfromseedsofBr

7、assicacampestrisby20-50%ammoniumsulfateprecipitation,DE-52ion-exchangecolumnandtrypsin-Sepharose4Baffinitychromatography.Amolecularweightof8kDawasestimatedbySDS-PAGE.TheBCTIwasfoundtobeathermostableBowman-BirktypeTIthatinhibitstrypsinatmolarratio1:1.Thesta

8、bilityofBCTIwasstudiedbyexposingittoalteredconditionsoftemperatureandprotein-denaturingagentslikeSDS,andmeasuringtheresidualinhibitoractivity.Theinhibitoryactivityretainedatleast50%activityafterbeingheatedto9