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《永川豆豉胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其降糖活性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、永川豆豉胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其降糖活性研究作者：郭瑞华，王和平，刘正猛，翟丽，吴少杰，段姣姣，王宝【关键词】豆豉；,,胰蛋白酶抑制剂；,,分离纯化；,,降糖作用 摘要：目的从豆豉中提取胰蛋白酶抑制剂，并探讨其降血糖活性。方法以永川豆豉为材料，经脱脂，酸性溶液提取，硫酸铵沉淀得到胰蛋白酶抑制剂粗提物，再经SephadexG-75凝胶层析得到纯化的胰蛋白酶抑制剂，以纯化的胰蛋白酶抑制剂给糖尿病小鼠灌胃并观察其降血糖活性。结果从豆豉里分离出的胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶的抑制率为30%~40%；用
2、抑制剂提取液给四氧嘧啶糖尿病模型小鼠连续灌胃4d，发现其血糖值明显低于模型组；观察小鼠的胰组织病理切片，与糖尿病小鼠比较，灌胃后的小鼠胰组织明显得到修复。结论豆豉提取液有较明显的降糖作用。 关键词：豆豉；胰蛋白酶抑制剂；分离纯化；降糖作用 PurificationATrypsinInhibitorfromLobsterSauceProducedinYongchuanandHypoglycemicActionofResearch Abstract：ObjectiveToisolateandp
3、urifythetrypsininhibitorfromLobstersauceandinvestigateitshypoglycemicaction.MethodsAtrypsininhibitorthelobstersauceofYongChuanbydefatting，extractionatographyonSephadexG-75，anditshypoglycemicactioninmiceesoxalylcarbamidemodel，thebloodglucoselevelsodel
4、group.ConclusionThetrypsininhibitorhashypoglycemicaction. Keyicaction 蛋白酶抑制剂广泛存在于动植物和微生物中，具有抑制蛋白酶的活性的作用，能与相应的蛋白酶水解，参与体内许多重要生理过程的调节。其中胰蛋白酶抑制剂具有重要的药用价值，对于急性胰腺炎、肺气肿、出血性和败血性休克等疾病有独特的疗效［1］。蛋白酶抑制剂被认为是植物天然的自我防御体系，是植物抗病基因工程的重要目的基因来源［2］。大豆胰蛋白酶抑制剂（STI）与其它临床上
5、广泛应用的胰蛋白酶抑制剂具有相似的性质，但其生理活性研究还没得到足够的重视。和其他胰蛋白酶抑制剂相比，大豆胰蛋白酶抑制剂具有分子量较小、免疫反应较弱、植物来源的抑制剂能避免携带动物病毒、原料来源广、价格低廉等优点，应当得到足够的重视。大豆胰蛋白酶抑制剂的种类有7~10种，目前研究证明主要有两种在动植物体内能抑制胰蛋白酶活力：一种为鲍曼克抑制剂(BBI),是由71个氨基酸组成的多肽，分子量为7975，分子内有7个二硫键，另一个为库尼兹抑制剂（KSTI），分子量约2万，分子内有2个二硫键。近年来国外
6、报道发现低浓度的BBI在动物体内对直肠癌、肝癌等多种癌症有抑制作用；另有报道大豆中微量胰蛋白酶抑制剂对于糖尿病治疗，调节胰岛素失调可能有一定效果［3］，但未见有降血糖作用的详尽报道。因此，对具有强抗癌活性且毒性小的胰蛋白酶抑制剂，从豆豉中分离纯化，使其成为抗癌、治疗糖尿病及其并发症的新药用于临床，有十分积极的意义。 1仪器与材料 DS1高速组织捣碎机（上海标本模型厂）,KDC1042离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司），722分光光度仪（上海精密科学仪器有限公司），AE240电子天平（M
7、ETTLER公司）；雄性昆明种小鼠（体重18~22g），永川豆豉(市售咸豆豉)，透析袋，牛胰蛋白酶(1∶250)、BAPNA・HCl(购自上海维思科贸有限公司),Tris(成都化学试剂厂生产)，sephadexG75(上海化学试剂厂生产)，四氧嘧啶(Alloxan，Sigma公司)，葡萄糖试剂盒GLU（氧化酶法，液体，北京北化康泰临床试剂有限公司），肝素钠（天津生物化学制药厂），其它试剂均为国产分析纯。 2方法与结果 2.1豆豉胰蛋白酶抑制剂的分离纯化 2.1.1豆豉胰蛋白酶
8、抑制剂粗提物的制备大豆胰蛋白酶抑制剂的提取方法已由Kakade等人在1974年提出。由于大豆胰蛋白酶抑制剂对热酸环境相对稳定，一般采用水浸酸提、沉淀再经离子交换或凝胶层析纯化制得。取2kg永川豆豉，于46℃恒温干燥9h,干燥后置于干净托盘中,把干燥豆豉粉碎、称重，然后加入去离子水2L，于0℃提取15h。15h后于3000r/min离心6min,沉淀弃去,收集上清液。取上清液，加入正己烷［正己烷∶上清液(1∶2)］，静置30min,后用1000ml的分液漏斗分离上述混合液,回收正己烷,收集棕色豆豉
