大豆SCoT分子标记技术体系的优化、验证及检测-论文.pdf

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1、中国油料作物学报2013，35(5)：491—498ChineseJournalofOilCropSciencesdoi：10．7505／j．issn．1007—9084．2013．05．005大豆SCoT分子标记技术体系的优化、验证及检测李强1,2，苏二虎，高聚林，孙继颖，于晓芳，谢岷(1．内蒙古农业大学农学院，内蒙古呼和浩特，010019；2．内蒙古农牧业科学院，内蒙古呼和浩特，010031)摘要：采用L(5。)正交试验和单因素试验2种方法对影响大豆SCoT—PCR反应的Mg浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用

2、量、引物浓度和模板DNA用量等因素进行优化，优化后的20txL大豆SCoT—PCR体系为：Mg浓度2．Ommol·L～、Taq聚合酶用量1．5U、引物浓度0．250txmol·L～、dNTPs浓度0．2mmol·L～、DNA模板用量30ng；退火温度最适为50．4℃。运用18个大豆品种验证，该反应体系稳定、可靠，并从82条引物中筛选出条带清晰、多态性较好的32条引物。利用大豆品种吉育75、本地黑豆及其10株F：对该反应体系进行了初步的遗传验证，结果显示，杂交后代植株中出现了双亲的位点和亲本位点的缺失。该反应体系的建立为大

3、豆种质遗传多样性分析、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种提供了新的技术手段。关键词：大豆；SCOT；正交设计；单因素试验；体系验证；引物筛选中图分类号：$565．103文献标识码：A文章编号：1007—9084(2013)05—0491—08Optimization，verificationanddetectionofSCoTmolecularmarkersysteminsoybeanLIQiang，SUEr—hu，GAOJu—lin，SUNJi—ying，YUXiao—fang，XIEMin(1．CollegeofAg

4、ronomy，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Huhhot010019，China；2．InnerMongoliaAcademyofAgriculturalandAnimalHusbandrySciences，Huhhot010031，China)Abstract：Startcodontargetedpolymorphism(SCoT)isanovelgenetargetedmarkertechnique．L25(5。)or—thogonalexperimentandsinglef

5、actorexperimentdesignwereappliedtooptimizeSCoT——PCRsystemofsoybeaninfivefactorsasMg“，dNTPs，primer，TaqDNApolymeraseandtemplateDNA．Theresultsshowedthattheopti—mizedsystemwasasfollows：atotalvolumeof201xLincluding2．0mmol·L一Mg，0．2mmol·L一dNTPs，0．2501xmol·L～primer，1．5UT

6、aqpolymerase，30ngDNAtemplate．Themostsuitableannealingtemperatureofprimerswas50．4cI=．TheoptimizedSCoT—PCRsystemwastestedoneighteensoybeans．andtheresultwasstableandreliable．Fromthe82primercombinationstested，32wereselectedwithclearbandpatternsandabundantpol—ymorphis

7、m．AmplificationsandgeneticverificationwerecarriedoutonJiyu75，localblacksoybeanandprogeniesfromJiyu75×localblacksoybean．Theresultsshowedpolymorphismbandsandcommonbandsfromparentsandprogeny．Thesystemprovidedanewtechnologyforevaluationofgeneticdiversity，construction

8、ofgeneticlinkagemapandmolecularmarkerassistedbreedingforthesoybean．Keywords：Soybean；SCoT；Orthogonaldesign；Singlefactorexperiment；Systemverification；Primersscre