木霉aflp分子标记技术体系的建立

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1、第49卷第1期湖北农业科学Vol．49No.120第101年期1月HubeiAgriculturalSciencesJan．，2010木霉AFLP分子标记技术体系的建立黄玉杰1211，3111，PAULHarvey，李纪顺，杨合同，吴远征，任艳，周红姿（1．山东省科学院中日友好生物技术研究中心／山东省应用微生物重点实验室，济南250014；2．澳大利亚联邦科学院昆虫研究所，阿德来德5064；3．山东理工大学生命科学学院，山东淄博255049）摘要：以摇床培养的木霉菌丝为材料，采用液氮研磨等方法提取到高

2、质量的基因组DNA，能够用于AFLP实验分析，探索和优化酶切－连接反应、预扩增和选择性扩增反应过程中的关键因素，建立了适合木霉AFLP的最佳试验体系和反应条件。利用该技术体系对不同时期保存的菌株及融合子进行AFLP指纹分析，发现不同时期保存的同一菌株指纹相同，融合子指纹兼有亲本菌株的特性。通过对木霉AFLP条件的探索和研究，建立了木霉基因组AFLP反应体系，得到的扩增多态性条带完全能够用于木霉遗传稳定性和多样性分析。关键词：木霉；AFLP；分子标记；反应体系中图分类号：S154．3；Q933文献标识码

3、：A文章编号：0439－8114（2010）01－0017-04TheEstablishmentofAFLPMarkersTechnicalSystemforTrichodermaspp．HUANGYu－jie1，PAULHarvey2，LIJi－shun1，YANGHe－tong1，3，WUYuan－zheng1，RENYan1，ZHOUHong－zi1（1．BiologyResearchInstitute，ShandongAcademyofSciences，Jinan250014，China；2．

4、EntomologyInstitute，AustralianCommonwealthScientificandResearchOrganization，Adelaide5064，Australia；3．CollegeofLifeandSciences，ShandongUniversityofTechnology，Zibo255049，Shandong，China）Abstract：Inordertoprovideabasisforidentificationanddiversityanalysisof

5、Trichodermaspp．throughAFLPreactionsystem，improvedmethodwasusedtoextracthighqualitygenomicDNAwithhyphafromTrichodermaspp．throughliquidnitrogenrubbing，whichcouldbeusedinamplifiedfragmentlengthpolymorphism（AFLP）analysis．Thekeyfactorswereexploredandoptimize

6、damongenzyme－digestedreaction，ligation，pre－amplificationandselectiveamplification．AFLPfingerprintingofstrainsstoredindifferentperiodsandthefusionswasanalysedwiththissystem．Theresultsshowedthatthefingerprintingofthesamestrainindifferentperiodswasthesame，

7、andthefingerprintingofthefusionshadthecharactersfromtheparents．Therefore，itwasausefultooltoresearchtheidentificationandgeneticdiversityinTrichodermaspp．throughoptimizedAFLPsystem．Keywords：Trichodermaspp．；AFLP；molecularmarker；reactionsystem扩增片段长度多态性（Ampl

8、ifiedfragment的重要组成群落之一［3］。该菌易于分离培养、生长迅lengthpolymorphism，AFLP）分子标记技术是1992速，可以产生葡聚糖酶、几丁质酶及蛋白酶等多种年由荷兰科学家Zabeau和Vos发明的，并获得了欧酶类［4］，对多种病原真菌具有拮抗作用，同时能够促洲专利［1，2］进植物生长，诱导其产生抗性，是一类重要的植物。该技术结合了RFLP和PCR的优点，具有灵敏度高、稳定性好和可靠性强等优点，被认为病害生防菌［5］。目前