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《柑桔srap和issr分子标记技术体系的建立与优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、分子植物育种，2008年，第6卷，第1期，第170-176页MolecularPlantBreeding,2008,Vol.6,No.1,170-176新思路、新技术、新方法NovelThinking&Technology柑桔SRAP和ISSR分子标记技术体系的建立与优化吴鑫1,2,3雷天刚2,3何永睿2,3刘小丰2,3许兰珍2,3彭爱红2,3陈善春2,3*1西南大学园艺园林学院,重庆,400716;2西南大学柑桔研究所,重庆,400712;3国家柑桔品种改良中心,重庆,400712*通讯作者,s
2、cchen2004@vip.sina.com摘要通过对PCR反应程序、反应体系(DNA模板量、PCR反应体积、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶用量、引物量)、电泳检测方法的系统优化，建立了柑桔SRAP-PCR和ISSR-PCR体系；以此进行大规模引物筛选，从而建立了柑桔SRAP和ISSR分子标记技术体系。SRAP-PCR：25μL体系，模板DNA25ng，Tris-HCl10mmol/L，KCl50mmol/L，Mg2+1.2mmol/L，dNTP120μmol/L，Taq酶1.5U，引物0.
3、4μmol/L，反应程序为94℃预变性5min，35个循环(94℃30s，47℃1min，72℃1min)，72℃延伸10min；ISSR-PCR：25μL体系，模板DNA25ng，Tris-HCl10mmol/L，KCl50mmol/L，Mg2+1.6mmol/L，dNTP200μmol/L，Taq酶1U，引物0.8μmol/L。筛选出稳定性好、多态性高的24对SRAP引物和13条ISSR引物。关键词柑桔,SRAP,ISSR,建立,优化EstablishmentandOptimizationof
4、SRAPandISSRMarkerSysteminCitrusWuXin1,2,3LeiTiangang2,3HeYongrui2,3LiuXiaofeng2,3XuLanzhen2,3PengAihong2,3ChenShanchun2,3*1CollegeofHorticulture&LandscapeDesigning,SouthwestUniversity,Chongqing,400716;2CitrusResearchInstitute,SouthwestUniversity,Chong
5、qing,400712;3NationalCitrusCultivarImprovementCenterofChina,Chongqing,400712*Correspondingauthor,scchen2004@vip.sina.comAbstractHerewehaveestablishedSRAP-PCRandISSR-PCRsysteminCitrusbyoptimizationofPCRreactionprogram,reactionsystem(templateDNA,reactio
6、nvolume,Mg2+,dNTP,TaqDNApolymeraseandprimer)andelectrophoresisdetectionexperiments.Basedonthesereactionsystems,amassofprimershavebeenscreened.Intheend,wegotoptimumSRAPandISSRmarkersystemsinCitrus.SRAP-PCRsystem:templateDNA25ng,Tris-HCl10mmol/L,KCl50mm
7、ol/L,Mg2+1.2mmol/L,dNTP120μmol/L,TaqDNApolymerase1.5U,primer0.4μmol/Lin25μLsystem,reactionprogram:initialdenaturationstepfor5minat94℃,followedby35cyclesat94℃for30s,47℃for1minand72℃for1min,followedbyafinalextensionstepat72℃for10min;ISSR-PCRsystem:templ
8、ateDNA25ng,Tris-HCl10mmol/L,KCl50mmol/L,Mg2+2.0mmol/L,dNTP200μmol/L,TaqDNApolymerase1U,primer0.8μmol/Lin25μLsystem.24pairsofSRAPprimersand13ISSRprimers,withhighstabilityandpolymorphism,hasbeenobtained.KeywordsCitrus,SRAP,ISSR,Establishment,Opt
