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时间:2019-06-01
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1、中国南方果树/SOUTHCHINAFRUITS2015;44(3):16~21,27櫨櫨櫨櫨櫨毦毦櫨櫨毦研究报告毦櫨櫨櫨櫨櫨·其他常绿果树·杨桃SCoT标记PCR反应体系建立与验证欧景莉,覃剑峰,余炳宁,黄小江,陆祖双,朱鹏锦,陈豪军(广西壮族自治区亚热带作物研究所,南宁,530001)摘要用单因素设计法对影响杨桃SCoT-PCR反应体系的主要因素Mg2+、dNTPs、引物、Taq2+DNA聚合酶及DNA模板浓度进行优化。结果表明,20μL反应体系中,含Mg2.5mmol/L,dNTPs0.3mmol/L,
2、模板DNA30mg/L,引物1.00μmol/L和TaqDNA聚合酶0.4U为最佳反应体系。用不同引物及杨桃DNA对该体系进行验证,扩增条带清晰,结果稳定可靠,证明该反应体系适用于杨桃SCoT-PCR扩增。关键词杨桃;SCoT;PCR;单因素;优化EstablishmentandVerificationofthePCRProtocolforSCoTMarkerinAverrhoacarambolaL.OUJingli,QINJianfeng,YUBingning,HUANGXiaojiang,LUZushu
3、ang,ZHUPengjin,CHENHaojun(GuangxiSubtropicalCropsResearchInstitute,Nanning,530001,China)AbstractSCoT-PCRamplificationsystemforAverrhoacarambolaL.wasoptimizedbasedonsin-2+,dNTPs,DNAtemplate,TaqDNApolymeraseandglefactorexperimentdesign,suchasMgprimer.Theresu
4、ltsshowedthattheoptimumconcentrationsforSCoT-PCRamplificationsystem2+,0.3mmol/LdNTPs,30mg/LDNAtemplate,1.00/Lprimer,were2.50mmol/LMgμmol0.4UTaqDNApolymerase,and2μL10×bufferintotal20μLreactionsystem,respectively.TheoptimumSCoT-PCRsystemwastestedbydifferentp
5、rimersandcarambolagermplasms.Thesteady,reliableandhighresolutionbandswereobtained.TheresultssuggestedthatthereactionsystemwassuitableforSCoT-PCRamplificationincarambola.KeywordsAverrhoacarambolaL.;SCoT;PCR;singlefactorexperiment;systemoptimization杨桃Averrho
6、acarambolaL.是酢浆草展前景十分广阔。但是,由于杨桃品种(系)科五敛子属多年生热带亚热带果树,原产于间的形态特征极其相似,很容易存在同物异亚洲东南部,我国已有1500多年的栽培历名或同名异物的现象,这给杨桃种质资源的[1]史,在广东、广西、福建、海南、台湾、云南等科学保护和有效利用带来了极大困难。虽然[2][4-5]省(区)均有较大的栽培面积。杨桃叶和根近年来国内外学者对杨桃的品种选育、栽[6-9][1,10-12]均可入药,果实可鲜食或加工成果脯、果汁培管理、采后加工、药用与药理作[3][13-
7、15]等。目前,杨桃在国际市场供不应求,其发用等方面已有较为深入的研究,但从收稿日期:2015-01-20;修回日期:2015-03-10基金项目:农业部农垦局物种资源保护财政专项经费(2014RZZY-25);广西壮族自治区直属公益性科研院所基本科研业务费专项(桂热研201309)资助。作者简介:欧景莉(1986—),女,硕士,研究实习员,主要从事果树栽培学研究。电话:(0771)2539210,E-mail:caoyinglinglan@gmail.com通信作者:覃剑峰。E-mai1:qinjianf
8、engmail@163.com。DOI:10.13938/j.issn.1007-1431.20150037第3期欧景莉,等:杨桃SCoT标记PCR反应体系建立与验证17DNA水平上分析杨桃种质资源的遗传多样1.2杨桃总DNA提取[25]性鲜有报道。地方特色杨桃种质资源遗传多用改良CTAB法提取杨桃基因组总样性研究在国内还未曾报道。国内学者已采DNA,并用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测其质[16-17][18]用RA
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