杨桃SCoT标记PCR反应体系建立与验证_欧景莉

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1、中国南方果树／ＳＯＵＴＨＣＨＩＮＡＦＲＵＩＴＳ２０１５；４４（３）：１６～２１，２７櫨櫨櫨櫨櫨毦毦櫨櫨毦研究报告毦櫨櫨櫨櫨櫨·其他常绿果树·杨桃ＳＣｏＴ标记ＰＣＲ反应体系建立与验证欧景莉，覃剑峰，余炳宁，黄小江，陆祖双，朱鹏锦，陈豪军（广西壮族自治区亚热带作物研究所，南宁，５３０００１）摘要用单因素设计法对影响杨桃ＳＣｏＴ－ＰＣＲ反应体系的主要因素Ｍｇ２＋、ｄＮＴＰｓ、引物、Ｔａｑ２＋ＤＮＡ聚合酶及ＤＮＡ模板浓度进行优化。结果表明，２０μＬ反应体系中，含Ｍｇ２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，ｄＮＴＰｓ０．３ｍｍｏｌ／Ｌ，

2、模板ＤＮＡ３０ｍｇ／Ｌ，引物１．００μｍｏｌ／Ｌ和ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．４Ｕ为最佳反应体系。用不同引物及杨桃ＤＮＡ对该体系进行验证，扩增条带清晰，结果稳定可靠，证明该反应体系适用于杨桃ＳＣｏＴ－ＰＣＲ扩增。关键词杨桃；ＳＣｏＴ；ＰＣＲ；单因素；优化ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＰＣＲＰｒｏｔｏｃｏｌｆｏｒＳＣｏＴＭａｒｋｅｒｉｎＡｖｅｒｒｈｏａｃａｒａｍｂｏｌａＬ．ＯＵＪｉｎｇｌｉ，ＱＩＮＪｉａｎｆｅｎｇ，ＹＵＢｉｎｇｎｉｎｇ，ＨＵＡＮＧＸｉａｏｊｉａｎｇ，ＬＵＺｕｓｈｕ

3、ａｎｇ，ＺＨＵＰｅｎｇｊｉｎ，ＣＨＥＮＨａｏｊｕｎ（ＧｕａｎｇｘｉＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ，５３０００１，Ｃｈｉｎａ）ＡｂｓｔｒａｃｔＳＣｏＴ－ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒＡｖｅｒｒｈｏａｃａｒａｍｂｏｌａＬ．ｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂａｓｅｄｏｎｓｉｎ－２＋，ｄＮＴＰｓ，ＤＮＡｔｅｍｐｌａｔｅ，ＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅａｎｄｇｌｅｆａｃｔｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｄｅｓｉｇｎ，ｓｕｃｈａｓＭｇｐｒｉｍｅｒ．Ｔｈｅｒｅｓｕ

4、ｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｆｏｒＳＣｏＴ－ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ２＋，０．３ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ，３０ｍｇ／ＬＤＮＡｔｅｍｐｌａｔｅ，１．００／Ｌｐｒｉｍｅｒ，ｗｅｒｅ２．５０ｍｍｏｌ／ＬＭｇμｍｏｌ０．４ＵＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ａｎｄ２μＬ１０×ｂｕｆｆｅｒｉｎｔｏｔａｌ２０μＬｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍＳＣｏＴ－ＰＣＲｓｙｓｔｅｍｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐ

5、ｒｉｍｅｒｓａｎｄｃａｒａｍｂｏｌａｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ．Ｔｈｅｓｔｅａｄｙ，ｒｅｌｉａｂｌｅａｎｄｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｂａｎｄｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒＳＣｏＴ－ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｃａｒａｍｂｏｌａ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＡｖｅｒｒｈｏａｃａｒａｍｂｏｌａＬ．；ＳＣｏＴ；ＰＣＲ；ｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；ｓｙｓｔｅｍｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ杨桃Ａｖｅｒｒｈｏ

6、ａｃａｒａｍｂｏｌａＬ．是酢浆草展前景十分广阔。但是，由于杨桃品种（系）科五敛子属多年生热带亚热带果树，原产于间的形态特征极其相似，很容易存在同物异亚洲东南部，我国已有１５００多年的栽培历名或同名异物的现象，这给杨桃种质资源的［１］史，在广东、广西、福建、海南、台湾、云南等科学保护和有效利用带来了极大困难。虽然［２］［４－５］省（区）均有较大的栽培面积。杨桃叶和根近年来国内外学者对杨桃的品种选育、栽［６－９］［１，１０－１２］均可入药，果实可鲜食或加工成果脯、果汁培管理、采后加工、药用与药理作［３］［１３－

7、１５］等。目前，杨桃在国际市场供不应求，其发用等方面已有较为深入的研究，但从收稿日期：２０１５－０１－２０；修回日期：２０１５－０３－１０基金项目：农业部农垦局物种资源保护财政专项经费（２０１４ＲＺＺＹ－２５）；广西壮族自治区直属公益性科研院所基本科研业务费专项（桂热研２０１３０９）资助。作者简介：欧景莉（１９８６—），女，硕士，研究实习员，主要从事果树栽培学研究。电话：（０７７１）２５３９２１０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃａｏｙｉｎｇｌｉｎｇｌａｎ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ通信作者：覃剑峰。Ｅ－ｍａｉ１：ｑｉｎｊｉａｎｆ

8、ｅｎｇｍａｉｌ＠１６３．ｃｏｍ。ＤＯＩ：１０．１３９３８／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－１４３１．２０１５００３７第３期欧景莉，等：杨桃ＳＣｏＴ标记ＰＣＲ反应体系建立与验证１７ＤＮＡ水平上分析杨桃种质资源的遗传多样１．２杨桃总ＤＮＡ提取［２５］性鲜有报道。地方特色杨桃种质资源遗传多用改良ＣＴＡＢ法提取杨桃基因组总样性研究在国内还未曾报道。国内学者已采ＤＮＡ，并用１．５％琼脂糖凝胶电泳检测其质［１６－１７］［１８］用ＲＡ