《表达传染性喉气管炎病毒gB主要抗原表位区域重组新城疫病毒的构建》.pdf

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1、第37卷第6期中国预防兽医学报Vo1．37．No．62015年6月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJun．2015doi：10．3969~．issn．1008—0589．2015．06．02表达传染性喉气管炎病毒gB主要抗原表位区域重组新城疫病毒的构建孙娜娜，王琪，李慧昕，刘胜旺(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽呼吸道病创新团队，黑龙江哈尔滨150001)摘要：为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB主要抗原表位区域的重组病毒，本研究以ILTVLJS09株的DNA为模

2、板，通过PCR技术扩增1323bpILTV编码gB主要抗原表位的基因片段(1bp～440bp)，将其插入到NDV感染性克隆pBR-FL中，构建含有ILTVgB主要抗原基因的NDVcDNA克隆pBR-FL—gB1。利用磷酸钙转染法，在辅助质粒pCI-neo-NP、pCI·neo-P和pCI-neo-L的共同作用下，将重组质粒转染于表达T7聚合酶重组痘病毒预感染的BSR．T7／5细胞，获得重组病毒rL—gB。。采用RT．PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液，结果表明重组病毒中含有相应的外源基因。利用gB的抗血清检测重组病毒中gB的表达，间接免疫荧光试验表明，在感染重组病毒的BSR．T7／5细胞

3、中目的蛋白得到表达。本研究为研制和开发传染性喉气管炎重组新城疫二联活疫苗奠定基础。关键词：重组新城疫病毒；传染性喉气管炎病毒；gB蛋白；主要抗原表位基因中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2015)06．0414．04ConstrutionofarecombinantNewcastlediseasevirusexpressingmajorantigenepitopesingBofinfectiouslaryngotracheitisvirusSUNNa-na，WANGei，LIHui—xin，L1USheng—wang(DivisionofAvianIn

4、fectiousDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVetefinawResearchInstituteChineseAcademyofAgriculturalSciences，Ha~in150001，China)Abstract：ToconstructtherecombinantNewcastlediseasevirus(NDV)expressingthemajorantigenepitopesingBofinfectiouslaryngotracheitisvirus(ILTV)，a1，323bpfra

5、gmentencodingatruncatedaal—aa440ofgBofILTVLJS09strainwasamplifiedbyPCRwithspecificprimersandclonedintoNDVinfectiouscloneofpBR—FLtoconstructthepBR-FL—gB1-440．Togetherwithhelperplasmids，therecombinantplasmidpBR-FL—gB1wastransfectedintotheBSR·T7／5cellswhichhadbeenpre-infectedwithrecombinantfowlpoxvi

6、rusexpressingT7polymerase．Then，therecombinantvirus(rL·gB1)wasrescued，andtheinsertionofthegBgenefragmentinrL—gBlwasverifiedbyRT-PCR．Moreover，theexpressionofthetruncatedgBofILTVintherL—gBlinfectedBSR—T7／5cellswasconfirmedbyindirectimmunofluorescenceassay．TheconstructionofrL-gB1wouldfacilitatetheimm

7、uno—protectiontestsfordevelopmentofthebivalentrecombinantvirusvaccineagainstNDVandILTVinfectionsinchickens．Keywords：recombinantNewcastlediseasevirus；infectiouslaryngotracheitisvirus；gBprotein；majorantigenepitopes*Corre